激動(dòng)GABAC受體對(duì)大鼠癲癇發(fā)作及腦內(nèi)GABA、GAT1和ρ2mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討癲癇發(fā)作期、自行終止發(fā)作過(guò)程中及終止發(fā)作后7天內(nèi)大鼠腦內(nèi)γ-氨基丁酸（GABA）、γ-氨基丁酸運(yùn)轉(zhuǎn)體1（GAT1）和GABAC 受體ρ2mRNA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。研究激動(dòng)GABAC 受體對(duì)癲癇發(fā)作、癇性放電和大鼠腦內(nèi)海馬區(qū)GABA、GAT1及ρ2mRNA表達(dá)的影響，查明激動(dòng)GABAC 受體在內(nèi)源性抗癲癇機(jī)制中的作用。
　　 方法：建立大鼠運(yùn)動(dòng)皮層定位注射青霉素（PNC）誘發(fā)癲癇發(fā)作模型，以GABAA 受體阻斷劑（荷包

2、牡丹堿，BIC）、GABAB 受體阻斷劑（高牛黃酸，3APS）和GABAC 受體激動(dòng)劑（蠅蕈醇，MUS）為工具藥，癲癇發(fā)作持續(xù)時(shí)間和Racine 癇性行為學(xué)分級(jí)作為效應(yīng)指標(biāo)；RM6240C 型多道生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)同步記錄癲癇大鼠皮層腦電圖（EcoG）。于癲癇發(fā)作高峰，在阻斷GABAA，B 受體條件下腹腔注射(ip)MUS（1.0mg·kg-1），分析激動(dòng)GABAC受體對(duì)癲癇發(fā)作及對(duì)EcoG 癇樣波潛伏期、發(fā)放頻率、最高振幅的影響。采

3、用免疫組化法測(cè)定癲癇發(fā)作高峰期及終止發(fā)作后即刻、1d、3d和7d 海馬區(qū)GABA和 GAT1含量；采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)在相同時(shí)間段測(cè)定GABAC 受體ρ2 mRNA表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：（1）大鼠運(yùn)動(dòng)皮層定位注射青霉素后，均出現(xiàn)Ⅰ～Ⅲ級(jí)發(fā)作，EcoG 出現(xiàn)明顯的棘波和棘慢波。癲癇發(fā)作高峰期給予GABAA，B 受體阻斷劑，可延長(zhǎng)發(fā)作持續(xù)時(shí)間，增強(qiáng)發(fā)作程度，并增加癇樣放電頻率和增大癇波振幅，與PNC 模型對(duì)照組比較，差

4、異均有顯著性（P<0.05）。激動(dòng)GABAC 受體，能明顯縮短大鼠癲癇發(fā)作持續(xù)時(shí)間，減輕發(fā)作程度，同時(shí)減少相同時(shí)間內(nèi)癇樣波發(fā)放頻率，降低癇波最高振幅，分別與PNC 模型組及GABAA，B 受體阻斷劑組比較，差異均有顯著性（P<0.05）。
　　 （2）在青霉素誘發(fā)癲癇發(fā)作高峰期，大鼠海馬區(qū)GABA 含量降低（P<0.05），而GAT1表達(dá)增高（P<0.05）；癲癇發(fā)作自行終止期及終止發(fā)作后1-7天內(nèi)GAT1與GABA蛋白表達(dá)變化

5、呈同向性改變，即GAT1隨GABA 升高而升高，直到兩者趨近于正常水平。自行終止發(fā)作期兩者同時(shí)增高（P<0.05），于發(fā)作終止后24h下降，1-7天內(nèi)兩者的變化呈持續(xù)降低，但與正常對(duì)照鼠比較仍呈升高趨勢(shì)（P<0.05），第7天趨于正常。阻斷GABAA，B 受體后GAT1與GABA蛋白表達(dá)變化與PNC 模型對(duì)照組大鼠的變化趨勢(shì)相同，但兩者升高更明顯，與青霉素組比較，差異均有顯著性（P<0.05）；同時(shí)使GABA和GAT1含量的動(dòng)態(tài)變化曲線

6、較PNC 模型對(duì)照組上移。激動(dòng)GABAC 受體后GABA和GAT1含量變化與PNC模型對(duì)照組自行終止癲癇發(fā)作過(guò)程中變化趨勢(shì)相同，但第7天恢復(fù)正常。終止癲癇發(fā)作過(guò)程中GABA和GAT1含量增高（P<0.05）。但升高幅度低于PNC 模型對(duì)照組和GABAA，B受體阻斷劑組，其動(dòng)態(tài)變化曲線相對(duì)于PNC 模型對(duì)照組呈現(xiàn)下移。
　　 （3）青霉素誘發(fā)癲癇發(fā)作高峰期大鼠海馬區(qū)ρ2mRNA表達(dá)下降（P<0.05），自行終止期及終止發(fā)作后1-3

7、天內(nèi)ρ2mRNA表達(dá)呈持續(xù)下降趨勢(shì)（P<0.05），第7天恢復(fù)正常；阻斷GABAA，B 受體，癲癇發(fā)作高峰期大鼠海馬區(qū)ρ2mRNA 含量降低，與PNC 模型對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性（P>0.05）；自行終止發(fā)作過(guò)程中ρ2mRNA表達(dá)升高（P<0.05），自行終止發(fā)作后24h下降，之后3天內(nèi)呈持續(xù)下降趨勢(shì)，第7天恢復(fù)正常。激動(dòng)GABAC 受體后大鼠海馬區(qū)ρ2mRNA表達(dá)變化與應(yīng)用GABAA，B 受體阻斷劑后ρ2mRNA表達(dá)變化趨勢(shì)相同；終

8、止發(fā)作過(guò)程中ρ2mRNA表達(dá)明顯升高（P<0.05），發(fā)作終止24h下降，之后3天內(nèi)呈持續(xù)下降趨勢(shì)，第7天回升，與PNC 模型對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性（P>0.05）。
　　 結(jié)論：（1）大鼠運(yùn)動(dòng)皮層定位注射青霉素誘發(fā)癲癇發(fā)作和癇性放電。GABAA，B 受體阻斷劑可增強(qiáng)青霉素誘發(fā)的癲癇發(fā)作程度及癇性放電發(fā)放頻率和癇波振幅，該效應(yīng)與取消了GABAA，B 受體介導(dǎo)的CNS大多數(shù)的快速抑制反應(yīng)有關(guān)。激動(dòng)GABAC 受體可終止PNC與G

9、ABAA，B 受體阻斷劑協(xié)同誘發(fā)大鼠癲癇發(fā)作，抑制癇性放電。證明機(jī)體的內(nèi)源性抗癲癇系統(tǒng)中存在“雙重保險(xiǎn)”機(jī)制。
　　 （2）在青霉素誘發(fā)癲癇發(fā)作高峰期，GABA 含量降低而GAT1增高；自行終止發(fā)作過(guò)程中及終止發(fā)作后1-7天內(nèi)GAT1作為腦內(nèi)GABA的調(diào)節(jié)體，與GABA蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化具有同向性改變。癲癇發(fā)作自行終止期兩者同時(shí)增高；發(fā)作終止后24h降低，但1-7天內(nèi)兩者較正常鼠仍呈持續(xù)升高趨勢(shì)，是避免復(fù)發(fā)的主要原因。
　

10、　 （3）阻斷GABAA，B 受體后GABA和GAT1含量較PNC 模型對(duì)照組顯著增高，自行終止發(fā)作后1-7天內(nèi)兩者的動(dòng)態(tài)變化曲線上移，說(shuō)明癲癇發(fā)作增強(qiáng)后，機(jī)體通過(guò)自身調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)一步促進(jìn)腦內(nèi)GABA 釋放和GAT1表達(dá)，GAT1逆向轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源性GABA 達(dá)突觸間隙，通過(guò)激動(dòng)GABAC 受體，產(chǎn)生緩慢而持久的抑制效應(yīng)，從而自行終止癲癇發(fā)作。
　　 （4）在阻斷GABAA，B 受體條件下激動(dòng)GABAC 受體，使GABA和GAT1升高

11、幅度明顯低于GABAA，B 受體阻斷劑組和PNC 模型大鼠，動(dòng)態(tài)變化曲線相對(duì)于PNC 模型組呈現(xiàn)下移，說(shuō)明激動(dòng)GABAC 受體后，使腦內(nèi)抑制性增強(qiáng)，減弱機(jī)體的自身調(diào)節(jié)機(jī)制，通過(guò)相對(duì)減少GABA 產(chǎn)生和GAT1表達(dá)，從而保持腦內(nèi)抑制與興奮處于平衡狀態(tài)。
　　 （5）青霉素誘發(fā)的癲癇模型中，癲癇發(fā)作可使大鼠腦內(nèi)海馬區(qū)ρ2mRNA表達(dá)持續(xù)下降。激動(dòng)GABAC 受體使ρ2mRNA表達(dá)短暫上調(diào)，而終止癲癇發(fā)作后24h下降，1-3天內(nèi)ρ2m