海馬電刺激對耐藥性癲癇大鼠腦組織GABA受體表達及鈉通道電流的影響.pdf

1、目的:建立多藥耐藥性顳葉癲癇模型,以海馬細胞外液GABA濃度、海馬細胞GABA(A)和GABA(B)受體表達以及海馬CA1區(qū)錐體細胞鈉通道電流的變化為觀察指標,探討海馬電刺激治療耐藥性顳葉癲癇的可能機制。
　　方法:選用Wistar大鼠230只制作慢性杏仁核點燃癲癇模型,模型制作成功后用經(jīng)典抗癲癇藥苯妥英鈉和苯巴比妥進行篩選,根據(jù)癲癇大鼠對藥物的反應區(qū)別出耐藥癲癇大鼠及藥物敏感大鼠用于下列實驗:1)用微透析方法收集腦組織細胞外液,

2、采用高效液相色譜法檢測海馬電刺激后GABA含量的變化;2)用免疫組織化學方法觀察海馬電刺激后腦組織內GABA(A)和GABA(B)受體表達的變化;3)用熒光定量PCR方法觀察海馬電刺激后GABA(A)和GABA(B)受體mRNA表達的變化:4)用膜片鉗全細胞記錄模式觀察海馬電刺激后腦細胞鈉通道電流的變化。
　　結果:1)在全部大鼠中成功點燃120只(點燃成功率52％),其中112只大鼠完成篩選過程,篩選出耐藥性癲癇大鼠30只(癲癇

3、耐藥率26.8％);2)腦細胞外液GABA濃度的變化:海馬刺激組8-9AM和8-9PM兩個時段的GABA濃度分別為32.69±7.80(μg/m1)和35.76±6.27(μg/ml),各時段的GABA濃度都明顯高于對照組的26.58±6.87(μg/ml)和31.50±4.87(μg/ml),差異具有顯著性(P＜0.05);3)GABA(A)和GABA(B)受體表達的變化:與耐藥對照組比較,海馬刺激組GABA(A)受體陽性細胞數(shù)無明顯

4、變化,但其表達的灰度值降低,提示GABA(A)受體表達增強,GABA(B)受體陽性細胞數(shù)增多、灰度值降低,表明GABA(B)受體表達增強,差異具有顯著性(P＜0.05);4)熒光定量PCR結果表明,海馬刺激組GABA(A)和GABA(B)受體mRNA的△Ct值和2-(△△Ct)分別為4.180±0.386和1.120±0.324,與耐藥對照組比較,其表達均明顯增強(P＜0.05);5)膜片鉗全細胞記錄觀察結果表明,海馬刺激組鈉通道電流峰