AE3蛋白在心肌細胞缺氧預處理保護中的作用.pdf

1、目的:以正常及穩(wěn)定低表達AE3基因的大鼠心肌樣細胞(H9c2)為研究對象,建立缺氧預適應保護模型,研究AE3蛋白在缺氧預適應保護中的作用并初步探討其可能的作用機制。
　　 方法:將大鼠心肌樣細胞(H9c2),均勻接種在六孔培養(yǎng)板上,隨機分為五個組:未轉染正常對照(Control)組、穩(wěn)定轉染陰性對照質粒(陰性對照組,Non-silencing shRNA)組、缺氧復氧(A/R)組、缺氧預適應(APC)組、穩(wěn)定低表達AE3基因+缺

2、氧預適應(RNAi+APC)組。檢測以下指標:①細胞存活率；②H9c2中AE3 mRNA的表達；③H9c2中AE3蛋白的表達；④細胞凋亡的程度；⑤細胞內活性氧(ROS)的含量；⑥細胞中SOD及GSH-Px的活性；⑦細胞中Ca2+含量；⑧細胞中Cl-含量
　　 結果:H9c2經A/R處理后,細胞活力明顯下降,AE3 mRNA和蛋白表達水平升高,細胞凋亡的程度嚴重,ROS含量增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,細胞中Ca2+及C

3、l-啥量升高,與Control組比較具有顯著性差異(p<0.01)。H9c2經APC處理后,細胞活力較A/R組明顯升高,AE3 mRNA和蛋白表達水平也明顯升高,細胞凋亡的程度顯著減輕,ROS含量減少,SOD及GSH-Px的酶活性上升,細胞中Ca2+及Cl-含量下降,與A/R組比較具有顯著性差異(p<0.01)。穩(wěn)定低表達AE3基因的H9c2細胞經APC處理后,細胞的活力較APC組明顯下降,AE3mRNA和蛋白表達水平也相應的明顯下降,

4、細胞凋亡的程度明顯加重,ROS含量增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,細胞中Ca2+及Cl-含量升高,與APC組比較具有顯著性差異(p<0.01)。而轉入非特異shRNA組,以上相應的指標并沒有特異性變化,與Control組比較沒有統(tǒng)計學差異(p>0.05)。
　　 結論:AE3蛋白介導心肌缺氧預適應保護作用來對抗缺氧復氧帶來的心肌損傷,機制可能為通過抑制胞內氯過載及減少細胞內ROS含量,進而抑制缺氧/復氧所致的氧化應激、鈣