冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白在心肌細(xì)胞凋亡中的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　 研究表明32℃低溫對(duì)腦損傷及心肌損傷有保護(hù)作用，臨床上多用于心臟手術(shù)和治療嚴(yán)重腦損傷。目前低溫保護(hù)作用的機(jī)制還不清楚。冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白(CIRP)是在32℃低溫情況下表達(dá)顯著增加的一種冷休克蛋白，其作用尚不明確。大量研究表明心肌細(xì)胞的異常凋亡在眾多心臟疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。本研究通過(guò)觀察CIRP在心肌細(xì)胞凋亡中的作用，旨在探討低溫對(duì)心肌損傷的保護(hù)作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 用H2o

2、2處理H9c2心肌細(xì)胞，建立H2O2誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞凋亡模型。用電子控溫細(xì)胞培養(yǎng)箱分別進(jìn)行常溫(37℃)和低溫(32℃)干預(yù)。用stealth-RNAi進(jìn)行干擾，下調(diào)CIRP表達(dá)。
　　 收集上清檢測(cè)乳酸脫氫酶(LDH)活性；MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；RT-PCR檢測(cè)H9c2心肌細(xì)胞內(nèi)CIRP mRNA表達(dá)變化；western blot檢測(cè)H9c2心肌細(xì)胞CIRP蛋白表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：

3、r>　　 常溫下CIRP在H9c2心肌細(xì)胞中有表達(dá)。將接受H2O2處理的H9c2心肌細(xì)胞分別置于常溫/低溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，常溫H2O2組細(xì)胞存活率低于低溫H2O2組和常溫對(duì)照組；常溫H2O2組的LDH活性、細(xì)胞凋亡率高于低溫H2O2組和常溫對(duì)照組，且從6h開(kāi)始兩處理組之間出現(xiàn)顯著差異(p<0.05)；低溫H2O2組中CIRP mRNA和蛋白表達(dá)水平高于常溫H2O2組，且從6h開(kāi)始出現(xiàn)顯著差異(p<0.05)；對(duì)低溫+H2O2組進(jìn)