重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子對脂肪干細(xì)胞分化的影響.pdf

1、研究目的:
　　 本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谔接懖煌瑵舛戎亟M人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Recombinant Human FGF-basic，rh-bFGF)對體外培養(yǎng)的人脂肪源干細(xì)胞(human adipose-derived stem cells，hASCs)誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞的影響，通過觀察hASCs誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞中新形成脂滴出現(xiàn)的時間、新形成脂肪細(xì)胞的增殖速率和成熟脂滴表面定位蛋白CIDEC的表達(dá)量，從而尋找體外促進(jìn)hASCs向

2、脂肪細(xì)胞分化所需加入rh-bFGF的最佳濃度。
　　 材料與方法:
　　 1.鄭大五附院健康抽脂患者獲得脂肪混懸液，采用膠原酶消化的方法，分離、提取hASCs，進(jìn)行體外培養(yǎng)、擴(kuò)增，在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)的觀察，臺盼藍(lán)染色后對hASCs進(jìn)行計數(shù)，應(yīng)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞表型的鑒定。將傳至第三代的細(xì)胞進(jìn)行成脂誘導(dǎo)并用油紅O染色對其進(jìn)行鑒定。
　　 2.hASCs傳至第三代時，分四組進(jìn)行成脂誘導(dǎo)，將加入0ng/ml rh

3、-bFGF的設(shè)為對照組，將加入10ng/mlrh-bFGF,20ng/ml rh-bFGF，40ng/ml rh-bFGF設(shè)為實(shí)驗(yàn)組。各組分別用油紅O染色連續(xù)監(jiān)測脂滴出現(xiàn)時間，并比較其差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3.各組分別于加入不同濃度的rh-bFGF之后的12h、24h、48h用MTT比色法檢測hASCs誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞的細(xì)胞增殖率。
　　 4.各組在成脂誘導(dǎo)的14d時，運(yùn)用western印跡法檢測成熟脂滴定位蛋

4、白CIDEC的蛋白表達(dá)量，并比較其差異。
　　 結(jié)果:
　　 1.體外提取、培養(yǎng)的hASCs光鏡下觀察成梭形，流式細(xì)胞儀鑒定其表型均符合hASCs標(biāo)準(zhǔn)，成脂誘導(dǎo)第7天后鏡下觀察到大小不一的脂滴，油紅O染色呈陽性。
　　 2.各組在油紅O染色時定性記錄脂滴出現(xiàn)時間，實(shí)驗(yàn)組和對照組之間平均出現(xiàn)脂滴時間比較p＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組各組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。其中40ng/ml rh-bFGF出現(xiàn)脂滴平均時

5、間為(11.5±1.9)h。
　　 3.各組分別加入不同濃度rh-bFGF后的12h、24h、48h，MTT比色法檢測新形成脂肪細(xì)胞的增殖率。其中40ng/ml rh-bFGF的吸光度平均值為0.522±0.100。
　　 4.Western印跡法檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組新形成脂滴表面定位蛋白CIDEC的表達(dá)量并進(jìn)行比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 實(shí)驗(yàn)組能縮短體外hASCs分化為