金鈴子散不同配伍的腸吸收特征研究.pdf

1、1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>　　 中藥復(fù)方是中醫(yī)傳統(tǒng)理論的精髓和特色,了解其配伍規(guī)律對(duì)臨床遣方及優(yōu)化給藥方案有重要的指導(dǎo)意義。中藥復(fù)方多以口服形式入藥,藥物在腸道中的吸收是決定藥物生物利用度和影響藥物發(fā)揮治療作用的關(guān)鍵因素。本研究以金鈴子散作為范例,采用正交設(shè)計(jì)的方法,從腸吸收角度,觀察該方組成藥物的代表成分川楝素(TSN)、延胡索甲素(CDL)、延胡索乙素(THP),以其數(shù)、量、相互比例為著眼點(diǎn),研究金鈴子散不同比例的配伍腸道吸收過(guò)程中的動(dòng)態(tài)

2、變化規(guī)律,以及組成藥物的影響大小和形式等,并以數(shù)學(xué)方程和圖解對(duì)其進(jìn)行描述,借以探討中藥復(fù)方的配伍原理以及科學(xué)性。
　　 2實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果
　　 2.1金鈴子散組方及其配伍的腸外翻吸收研究
　　 方法:采用L9(34)正交設(shè)計(jì)表,將金鈴子散組方中的川楝子和延胡索作為兩因素,每個(gè)因素設(shè)3個(gè)不同劑量作為實(shí)驗(yàn)的三水平,研究金鈴子散9個(gè)不同配比及其相應(yīng)的單味藥物在腸道中的吸收。借助腸外翻模型,以金鈴子散中代表成分TSN、C

3、DL、THP為檢測(cè)對(duì)象,利用HPLC檢測(cè)三個(gè)代表成分在單味藥和不同配比方中的經(jīng)時(shí)吸收量,計(jì)算各成分在不同腸段的K值。通過(guò)正交極差分析、方差分析以及歸一化加權(quán)綜合評(píng)分法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:川楝子提取物中TSN和延胡索提取物中CDL、THP相同成分在不同腸段吸收形式一致,均為零級(jí)吸收(R2>0.95),以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主要轉(zhuǎn)運(yùn)形式,各腸段吸收總趨勢(shì)在小腸不同腸段吸收相近,均大于在結(jié)腸的吸收；其中THP的腸吸收較好,各

4、腸段吸收率均大于40％,甚至高者達(dá)到70％以上；TSN和CDL,的腸吸收較差,各腸段吸收率在20％以下。
　　 正交設(shè)計(jì)研究顯示金鈴子散中川楝子和延胡索在不同配伍比例時(shí)在腸道的吸收動(dòng)力學(xué)不同。相同成分在腸道不同部位的吸收趨勢(shì)大致相同,不同成分的最佳吸收組合有所不同；在本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的因素水平中,TSN、CDL、THP在最佳腸吸收時(shí)川楝子和延胡索的配比分別為:4:3(TSN),4:3(CDL),1:3(THP)。對(duì)歸一化后綜合評(píng)分結(jié)果

5、進(jìn)行正交統(tǒng)計(jì),同時(shí)選用雙變量Spreaman相關(guān)和回歸分析各藥的作用大小和形式,最終得出最優(yōu)配比。結(jié)果顯示在本研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中,不同腸段所得的結(jié)果一致,川楝子的對(duì)全方腸吸收的影響程度稍大于延胡索,其吸收最優(yōu)配伍為川楝子:延胡索=4:3(9＃)。其次是3:3(6#)和4:2(8#})兩配伍方。
　　 2.2金鈴子散單方及優(yōu)選配伍組方在Caco-2細(xì)胞中的吸收研究
　　 方法:利用Caco-2細(xì)胞類似小腸上皮細(xì)胞的特性,研究中

6、藥提取物及其配伍在細(xì)胞中的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)特征。攝取實(shí)驗(yàn):將細(xì)胞接種于24孔板,測(cè)定加藥1h后的細(xì)胞內(nèi)藥物攝取量；轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn):將細(xì)胞接種到Millicell小室膜上,待細(xì)胞生長(zhǎng)21d具有極性、分化完成,選取完整性良好的小室進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)時(shí)分別將藥物加入AP或BL側(cè),檢測(cè)接收端的目標(biāo)成分,分析藥物吸收／外排量的變化。
　　 結(jié)果:細(xì)胞生長(zhǎng)21天堿性磷酸酶活力AP側(cè)為BL側(cè)的2倍以上(P<0.05),說(shuō)明細(xì)胞具有極性,分化完成；熒光素鈉

7、在2h其透過(guò)率小于1％,TEER值達(dá)到500Ω·cm2,證明Caco-2細(xì)胞完整性較好,可用于轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)。
　　 Caco-2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明。TSN、CDL、THP以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主,Pb-a／Pa-b比例均在1左右。金鈴子散不同配伍比例時(shí),各代表成分在細(xì)胞中的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)均發(fā)生相應(yīng)改變。川楝子和延胡索配伍后可見(jiàn)CDL的攝取有降低趨勢(shì),其吸收和外排明顯降低(P<0.05)；而THP無(wú)論是在攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)方面均有大幅度的升高(P<0.05

8、、P<0.01)。在Caco-2實(shí)驗(yàn)中THP的吸收率明顯高于CDL；川楝子和延胡索配伍后對(duì)TSN的攝取明顯增加(P<0.05),但在細(xì)胞吸收和外排方面并未見(jiàn)明顯的變化。
　　 3結(jié)論
　　 本實(shí)驗(yàn)利用腸外翻模型和Caco-2細(xì)胞模型,研究金鈴子散組方中單味藥物和不同配伍中代表成分的吸收變化情況,結(jié)果顯示,金鈴子散組成藥物川楝子和延胡索中代表成分在腸道中的吸收機(jī)制均以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主要形式,兩藥配伍比例不同時(shí),全方的腸吸收程度