透明顫菌血紅蛋白基因在蘇云金桿菌的克隆與表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、微生物體中存在著控制和應答溶氧水平的敏感體系,該體系通過改變微生物的生長狀態(tài)維持穩(wěn)定的溶氧水平.已知透明顫菌在貧氧環(huán)境中能大量合成血紅蛋白(VHb)以適應其在貧氧環(huán)境中生存,目前該蛋白的基因已經被克隆到多種異源生物體內,并促進了異源生物體在微氧條件下的生長和蛋白質的合成能力.該研究是將透明顫菌血紅蛋白基因(vgb)克隆到蘇云金桿菌(Bacillusthuringiensis,Bt)HBF-1和大腸桿菌中,研究該基因對蘇云金桿菌和大腸桿菌

2、生長的促進作用.為了使vgb基因在蘇云金桿菌中高效表達,該研究采用革蘭氏陰性菌與革蘭氏陽性菌的穿梭質粒pMK4作為載體,果聚蔗糖酶基因(sacB)作為啟動子,構建了含有果聚糖酶基因sacB啟動子和vgb基因的重組質粒pMK-SV.創(chuàng)造性地采用原生質體電轉化的方法,將pMK-SV轉入蘇云金桿菌中,經影印篩選得到了轉化子Bt4.對Bt4誘導表達,與原菌株相比Bt4的生長量增加了20.2%.為了將含有天然啟動子的vgb基因克隆到pMK4中,該

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