馬鈴薯非共生血紅蛋白基因StHb1的克隆、表達(dá)及功能分析.pdf

1、馬鈴薯晚疫病是一種由致病疫霉真菌引起的世界性流行病害，可以導(dǎo)致馬鈴薯莖、葉和塊莖等組織的壞死腐爛，嚴(yán)重影響其品質(zhì)及產(chǎn)量。目前，防治該病害最具有前景的方法是篩選高效穩(wěn)定的抗性基因并利用基因工程手段培育晚疫病抗病品種。
　　本研究利用半定量 RT-PCR、亞細(xì)胞定位等手段對(duì)馬鈴薯非共生血紅蛋白基因 StHb1與馬鈴薯晚疫病之間的相關(guān)性進(jìn)行了初步探討，主要包括以下幾個(gè)方面：
　　（1）利用RT-PCR技術(shù)，對(duì)馬鈴薯 StHb1基因

2、在不同抗性品種各組織部位中的表達(dá)情況進(jìn)行了研究，結(jié)果表明其表達(dá)具有組織特異性，其中在馬鈴薯塊莖中表達(dá)量最高，其次為根（感性品種荷蘭十五）或莖（抗性品種隴薯三號(hào)）組織，而在葉和花中幾乎沒(méi)有表達(dá)。
　?。?）利用致病疫霉游動(dòng)孢子懸液、H2O2和SNP（NO供體）侵染馬鈴薯抗、感病品種的塊莖組織，半定量 RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，StHb1基因的表達(dá)在抗性品種和感性品種塊莖組織中均受致病疫霉的侵染所抑制；外源 NO和H2O2的作用亦可明顯地

3、抑制 StHb1基因的表達(dá)，但在抗性品種中該基因受抑制的程度低于感性品種。
　?。?）根據(jù)StHb1基因開(kāi)放閱讀框序列設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增 StHb1基因 cDNA序列，成功構(gòu)建了StHb1基因與綠色熒光蛋白基因的融合表達(dá)載體 pBI121-StHb1-GFP。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將重組載體轉(zhuǎn)化洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞，通過(guò)熒光顯微鏡觀察融合蛋白的瞬時(shí)表達(dá)以確定 StHb1蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布。結(jié)果表明StHb1-GFP融合蛋白主要分布于細(xì)胞核中，亦有少