馬鈴薯非共生血紅蛋白基因StHb1的克隆、表達及功能分析.pdf

1、馬鈴薯晚疫病是一種由致病疫霉真菌引起的世界性流行病害，可以導致馬鈴薯莖、葉和塊莖等組織的壞死腐爛，嚴重影響其品質(zhì)及產(chǎn)量。目前，防治該病害最具有前景的方法是篩選高效穩(wěn)定的抗性基因并利用基因工程手段培育晚疫病抗病品種。
　　本研究利用半定量 RT-PCR、亞細胞定位等手段對馬鈴薯非共生血紅蛋白基因 StHb1與馬鈴薯晚疫病之間的相關(guān)性進行了初步探討，主要包括以下幾個方面：
　?。?）利用RT-PCR技術(shù)，對馬鈴薯 StHb1基因

2、在不同抗性品種各組織部位中的表達情況進行了研究，結(jié)果表明其表達具有組織特異性，其中在馬鈴薯塊莖中表達量最高，其次為根（感性品種荷蘭十五）或莖（抗性品種隴薯三號）組織，而在葉和花中幾乎沒有表達。
　?。?）利用致病疫霉游動孢子懸液、H2O2和SNP（NO供體）侵染馬鈴薯抗、感病品種的塊莖組織，半定量 RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，StHb1基因的表達在抗性品種和感性品種塊莖組織中均受致病疫霉的侵染所抑制；外源 NO和H2O2的作用亦可明顯地

3、抑制 StHb1基因的表達，但在抗性品種中該基因受抑制的程度低于感性品種。
　?。?）根據(jù)StHb1基因開放閱讀框序列設(shè)計引物擴增 StHb1基因 cDNA序列，成功構(gòu)建了StHb1基因與綠色熒光蛋白基因的融合表達載體 pBI121-StHb1-GFP。利用農(nóng)桿菌介導法將重組載體轉(zhuǎn)化洋蔥內(nèi)表皮細胞，通過熒光顯微鏡觀察融合蛋白的瞬時表達以確定 StHb1蛋白在細胞內(nèi)的分布。結(jié)果表明StHb1-GFP融合蛋白主要分布于細胞核中，亦有少