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文檔簡(jiǎn)介
1、背景:小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最主要的免疫細(xì)胞,其過度激活在很多炎癥相關(guān)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生與發(fā)展中起重要作用。從中草藥中尋找不良反應(yīng)少、具有顯著的中樞抗炎作用及神經(jīng)保護(hù)作用的藥物是在炎癥相關(guān)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療的研究中的熱點(diǎn)。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)從傳統(tǒng)中藥川木香中提取的單體化合物YJ-8能顯著抑制干擾素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一氧化氮。對(duì)YJ-8的進(jìn)一步結(jié)構(gòu)分析表明其是已知化合物澤瀉醇(alismol)。本研究在前期發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步研
2、究alismol對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響及機(jī)制,探討其神經(jīng)保護(hù)的作用。
目的:研究alismol對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞激活產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)及細(xì)胞因子的抑制作用及機(jī)制,并進(jìn)一步探討alismol對(duì)炎癥導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用。
方法:采用脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)刺激小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞BV2細(xì)胞建立小膠質(zhì)細(xì)激活的細(xì)胞模型。Alismol預(yù)處理后采用Griess試劑法測(cè)定NO釋放量的變化。用West
3、ern Blot法和半定量RT-PCR法檢測(cè)alismol預(yù)處理后誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)、環(huán)氧合酶2(Cyclooxygenase2,COX-2)、細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α以及上游信號(hào)通路相關(guān)分子的變化。ELISA法檢測(cè)PGE2和細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α表達(dá)量的變化。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胞內(nèi)活性氧自由基(Reactive oxygen s
4、pecies,ROS)生成量的變化。最后,將LPS和alismol共同處理過的BV2細(xì)胞條件培養(yǎng)液加入神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系,檢測(cè)神經(jīng)元細(xì)胞存活率是否受到影響。
結(jié)果:alismol能明顯抑制LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞NO和PGE2的釋放,通過部分調(diào)節(jié)NF-κB和PI3K-Akt通路,抑制炎癥介質(zhì)以及細(xì)胞因子的表達(dá),同時(shí)明顯緩解胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生。alismol能通過減少小膠質(zhì)細(xì)胞激活而有效減少炎癥反應(yīng)引起的神經(jīng)元損傷,起到一定的神
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