膽固醇吸收關(guān)鍵基因Numb與冠心病及血脂水平的關(guān)聯(lián)分析研究.pdf

1、目的：⑴識別膽固醇關(guān)鍵基因變異與疾病的關(guān)聯(lián)研究，為新疆地區(qū)漢族、維族、哈族人群心血管疾病高危人群制定和防止疾病最佳治療方案提供幫助。⑵探討Numb基因多態(tài)性與膽固醇吸收的分子機制研究。（3）探討新疆漢族、維吾爾族人群Numb基因多態(tài)性與冠心病及血脂的相關(guān)性研究。
　　方法：①收集民族、性別、年齡均匹配的健康患者共349例并根據(jù)低密度脂蛋白-膽固醇水平（LDL-C），分極高、極低組，采用多重酶聯(lián)免疫法PCR的方法，對32條膽固醇相關(guān)

2、基因，共635個外顯子片段進行高通量二代測序，分析基因變異位點與血脂的關(guān)系。②采用Numb基因的所有外顯子和外顯子-內(nèi)含子連接區(qū)域測序的方法，對671例血脂LDL-C極高，極低組患者進行分析，發(fā)現(xiàn)Numb基因新的突變位點，利用細(xì)胞實驗對Numb變異位點與膽固醇吸收的分子機制進行研究。③采用病例-對照研究，選擇經(jīng)冠狀動脈造影確診的冠心病患者890例和造影陰性的健康人群對照組786例，利用Taqman技術(shù)，對Numb基因多態(tài)性進行基因分型以

3、及單體型構(gòu)建，分析Numb基因標(biāo)簽SNPs和突變位點與冠心病及血脂的關(guān)系。
　　結(jié)果：⑴利用人類膽固醇關(guān)鍵基因外顯子測序的方法對新疆漢族、維吾爾族、哈薩克族人群進行差異性篩選并篩查獲得膽固醇基因表達(dá)差異32條。漢族相較于其他兩個民族獨有的1條差異基因；維吾爾族相較于其他兩個民族獨有的膽固醇相關(guān)基因差異有6條；哈薩克族相較于其他兩個民族獨有的1條差異基因，說明民族間基因差異表達(dá)，對于防治心血管疾病提供了一定的基礎(chǔ)。⑵對新疆地區(qū)篩選的

4、671例患者中進行Numb基因外顯子測序，發(fā)現(xiàn)基因編碼區(qū)的兩個非同義突變和八個同義突變，兩個非同義突變（A587T和Q533K）均分布在血漿低密度脂蛋白-膽固醇水平極低組。⑶對Numb變異位點進行膽固醇響應(yīng)、蛋白定位、親和力及穩(wěn)定性等實驗，進一步在細(xì)胞水平上驗證兩個突變體在膽固醇循環(huán)中的作用，發(fā)現(xiàn)與野生型相比，Numb A587T和Q533K變異均對膽固醇響應(yīng)和穩(wěn)定性檢測無明顯差別，而細(xì)胞定位較少和相關(guān)蛋白親和力的作用減弱。⑷Numb基

5、因標(biāo)簽SNP的位點（rs2108552）與冠心病的發(fā)病具有相關(guān)性。在新疆漢族總體和男性人群中 Numb基因rs2108552的顯性模型與冠心病具有關(guān)聯(lián)性，在調(diào)整了體質(zhì)指數(shù)（BMI）、甘油三酯(TG)、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）、高血壓、糖尿病及吸煙等危險因素的影響，rs2108552的顯性模型在總體和男性人群中仍存在差異并有統(tǒng)計學(xué)意義（總：OR：1.876，95％CI：1.482～1.979，P=0.004；男

6、：OR：1.498，95%CI：1.305～1.815，P=0.006），而在女性人群中差別無統(tǒng)計學(xué)意義。在維吾爾族人群中未發(fā)現(xiàn)此位點與冠心病具有相關(guān)性。另外，Numb基因兩個突變位點（A587T和Q533K）在漢族、維吾爾族人群中未發(fā)現(xiàn)與冠心病具有相關(guān)性。⑸Numb基因3個標(biāo)簽SNPs位點在漢族和維吾爾族人群中共建立5個單體型。在漢族總體、男性人群中，G-G-T單體型對照組中的頻率顯著高于CAD組（P=0.007，OR=0.616；P

7、=0.013，OR=0.701），而T-C-T單體型在病例組頻率顯著高于對照組（P=0.002，OR=1.482；P=0.004，OR=1.334），而在女性人群中差別無統(tǒng)計學(xué)意義。在維吾爾族人群中，冠心病組和對照組單體型頻率未發(fā)現(xiàn)差別有統(tǒng)計學(xué)意義。⑹在調(diào)整性別、年齡、民族、肥胖、吸煙等因素前后rs12435797基因型均與TC水平，rs2108552基因型與TC、LDL-C水平，rs1019075與TC水平具有關(guān)聯(lián)性且差別有統(tǒng)計學(xué)意義

8、（均P＜0.05）。另外，Numb基因兩個突變位點（A587T和Q533K）等位基因與TC、LDL-C、HDL-C具有關(guān)聯(lián)性且差別有統(tǒng)計學(xué)意義（均P=0.000）。
　　結(jié)論：①基因外顯子測序結(jié)果表明血脂相關(guān)基因在民族間有差異表達(dá)變化，特別是維吾爾族和哈薩克族；發(fā)現(xiàn)與膽固醇吸收關(guān)鍵基因NPC1L1，Numb，SOAT2及基因突變位點。②新發(fā)現(xiàn)的Numb基因的兩個非同義突變A587T和Q533K可能對Numb蛋白膽固醇吸收的功能有影