因寧片制劑工藝及其對甲亢陰虛小鼠的藥理作用研究.pdf

1、研究背景:甲狀腺功能亢進癥(簡稱:甲亢)系指由多種病因導致體內甲狀腺素分泌過多,引起以神經(jīng)、循環(huán)、消化等系統(tǒng)興奮性增高和代謝亢進為主要表現(xiàn)的一組疾病的總稱,是一種臨床綜合征,常見癥狀為多食易饑、體重減輕、心動過速、乏力、急躁、易激動等。甲亢病因較為復雜,其確切發(fā)病機制尚未明確,臨床上以彌漫性毒性甲狀腺腫最常見,約占所有甲亢患者的85％,其次為結節(jié)性甲狀腺腫伴甲亢和亞急性甲狀腺炎伴甲亢。中醫(yī)將本病歸于“癭、癭氣”范疇。一般認為其發(fā)病因為首

2、先在于患者素體陰虧,腎陰不足,陰虛陽亢,加上情志失調,變生陰虛火旺、氣陰兩虛、痰濕阻滯等病機,其病位涉及肝、腎、心、脾、肺,而以肝腎為主[1]。
　　 現(xiàn)代醫(yī)學目前多采用抗甲狀腺藥物治療及放射性碘和手術等措施?？辜谞钕偎幬锏淖饔檬且种萍谞钕俸铣杉谞钕偌に?后兩種是通過破壞甲狀腺組織減少甲狀腺激素的產(chǎn)生達到治療目的[2]。然而三者對甲亢均不能進行病因治療,且容易發(fā)生粒細胞減少、藥疹、肝損害等不良反應。
　　 近十年來中醫(yī)藥

3、治療甲亢有了可喜的進展,新的治療方劑的出現(xiàn)和治療方法的不斷完善,使其在改善甲亢癥狀、調節(jié)人體免疫機制等方面顯示出獨特優(yōu)勢,使臨床療效得到了提高,且毒副反應小,降低了復發(fā)率,而且在一定程度上揭示了中藥治療甲亢的作用機理,逐漸受到中外研究者的重視。愈來愈多的研究表明:中藥將在未來防治甲亢中發(fā)揮肯定作用。
　　 因寧片為廣州南方醫(yī)院臨床經(jīng)驗方,它是以中醫(yī)理論為依據(jù),借助現(xiàn)代科技,從藥理學、病理學等多學科角度入手,篩選了上百種中草藥,最

4、終由黃芪、昆明山海棠、鱉甲、當歸、生地、甘草等九味中藥科學配伍研制而成,諸藥相和,共奏養(yǎng)陰軟堅,解毒散結之功。經(jīng)臨床觀察表明:因寧片對陰虛型、痰濕型、血瘀型甲亢均具有較好的臨床療效,可以有效地消除甲亢癥狀,快速修復機體各個系統(tǒng)的正常功能,全面提高自身的免疫功能,達到標本兼治的目的。而且初步預試驗顯示:因寧片對肝臟具有保護作用,避免了甲亢本身以及抗甲狀腺藥物引起的肝損害,填補了抗甲亢藥物防肝損害治療的用藥空白。
　　 本研究課題將

5、結合藥劑學、天然藥物化學、藥理學、內分泌學、核醫(yī)學、衛(wèi)生統(tǒng)計學等學科的研究方法和技術,運用正交法對因寧片的制劑工藝進行優(yōu)化,并且將考察因寧片對甲亢陰虛小鼠的藥理作用。最終為因寧片的新藥研發(fā)及臨床甲亢的治療提供實驗依據(jù)。
　　 目的:采用正交試驗設計法對因寧片的制劑工藝進行優(yōu)化,優(yōu)選出因寧片的最佳制劑工藝條件,為因寧片的新藥研發(fā)提供試驗依據(jù)；利用甲狀腺素和利血平誘導建立小鼠甲亢陰虛征模型；觀察因寧片對甲亢陰虛小鼠的藥理作用,對各組

6、小鼠的外觀行為,攝食量及飲水量,體重,甲狀腺臟器系數(shù),肝臟臟器系數(shù),cAMP、cGMP水平,常壓耐缺氧時間,負重游泳時間,游泳后肝糖原含量變化情況進行計算檢測和分析,為因寧片的新藥研發(fā)及臨床甲亢的治療提供試驗依據(jù)。
　　 方法
　　 1.正交法優(yōu)選因寧片的制劑工藝的研究首先以浸膏得率為指標進行預實驗對提取次數(shù)進行考察,根據(jù)預實驗結果選取加水量、煎煮時間、浸泡時間三個因素,每個因素選取3個水平,分別為:加水量(12、10、

7、8倍)；煎煮時間(3,3,3、3,2,2、3,2,1小時)；浸泡時間(1.5、1.0、0.5小時),以浸膏得率、黃芪甲苷含量、表-兒茶素含量為指標,采用正交試驗法對因寧片的制劑工藝進行優(yōu)化,通過直觀分析及方差分析優(yōu)選出最佳工藝,并對最優(yōu)制劑工藝進行驗證試驗。黃芪甲苷及表-兒茶素的含量測定均采用高效液相色譜法。
　　 2.甲狀腺素和利血平誘導的小鼠甲亢陰虛證模型的制備昆明小鼠48只,♀♂各半,隨機分為4組,每組12只,第1組為空白

8、對照組,第2～4組為甲狀腺素和利血平混懸液低、中、高劑量組?？瞻讓φ战M給予等體積的生理鹽水,其余各組分別ig給予75mg/kg甲狀腺素和0.5mg/kg利血平、150mg/kg甲狀腺素和1mg/kg利血平、300mg/kg甲狀腺素和2mg/kg利血平生理鹽水混懸液。1次/d,連續(xù)給藥7d。觀察造模后各組小鼠的外觀、行為、體重的變化,用放射免疫法和免疫放射法檢測各組小鼠血清T3、T4、FT3、FT4、TSH值,摘取小鼠甲狀腺、肝臟組織稱量

9、,計算臟器系數(shù)。
　　 3.因寧片對甲亢陰虛小鼠的藥理作用研究將昆明種小鼠按體質量隨機分為6組,即空白對照組,模型對照組,陽性對照組(甲亢靈組),因寧片低、中、高劑量組,每組10只,♀♂各半。除對照組給予等體積的生理鹽水外,其余組每日灌胃300mg/kg甲狀腺素混懸液及2mg/kg利血平,連續(xù)7d進行甲亢陰虛型小鼠造模。第8d起每日給藥一次進行治療,對照組及模型組給予等體積生理鹽水,甲亢靈組1.2g/kg甲亢靈片混懸液,因寧片低

10、、中、高劑量組分別給藥0.6g/kg、1.2g/kg、1.8g/kg的因寧片混懸液(相當于臨床用藥劑量的10倍、20倍、30倍),連續(xù)30d。觀察各組小鼠外觀行為,攝食量及飲水量等一般情況,并于造模前,造模7d,治療30d后稱量各組小鼠體重。測定各組小鼠的甲狀腺臟器系數(shù),肝臟臟器系數(shù),cAMP、cGMP水平,常壓耐缺氧時間,負重游泳時間,游泳后肝糖原含量變化情況。
　　 結果
　　 1.正交法優(yōu)選因寧片的制劑工藝的研究預

11、實驗結果表明:第3次提取的浸膏得率大于3次總量的10％,且第三次提取后除氨基酸未檢測出以外,皂苷類及鞣質類仍能檢測出,結果較明顯。因此,確定提取次數(shù)為3次。正交試驗結果表明:A因素選擇A1水平即12倍加水量；B因素對浸膏得率影響不顯著,對黃芪甲苷含量和表-兒茶素含量影響顯著,考慮到后兩個評價指標更為重要,所以B因素選擇B2水平或B3水平即三次的煎煮時間分別為3,2,2h和3,2,1h；C因素對浸膏得率影響不顯著,對黃芪甲苷含量和表-兒茶

12、素的含量雖然有顯著影響,但都不及B因素重要,所以考慮生產(chǎn)成本及生產(chǎn)時間,C因素選擇C2水平即浸泡時間為1.0h。僅需對B2和B3進行進一步的驗證。因此,根據(jù)正交試驗結果優(yōu)選出的因寧片制劑工藝的最優(yōu)條件為A1B3C1或A1B2C2,即提取時加水量為12倍,煎煮時間分別為3,2,2h和3,2,1h,浸泡時間為1.0h。
　　 經(jīng)過驗證試驗及重復試驗,本試驗研究最終確定了因寧片制劑工藝的最優(yōu)條件為:A1B2C2,即提取時加水量為藥材的

13、12倍,提取時間分別為3,2,2h,浸泡時間為1.0h,且此工藝條件合理穩(wěn)定可行。
　　 2.甲狀腺素和利血平誘導的小鼠甲亢陰虛證模型的制各本研究結果表明:通過灌服甲狀腺素和利血平混懸液的方法進行造模,實驗結束后與空白對照組比較,第4組即甲狀腺素和利血平混懸液高劑量組小鼠T3、T4、FT3、FT4值顯著升高(P<0.05),且TSH值顯著降低(P<0.05),體重顯著減輕(P<0.05),甲狀腺、肝臟臟器系數(shù)均顯著增大(P<0.

14、05),具有中醫(yī)陰虛證的臨床表現(xiàn)如躁動不安、皮毛光澤度差、進食量減少、飲水量減少等,說明本實驗制備的陰虛癥動物模型是成功的,其劑量選擇為甲狀腺素300mg/kg和2mg/kg利血平為宜。
　　 3.因寧片對甲亢陰虛小鼠的藥理作用研究本研究結果表明:通過灌服甲狀腺素和利血平混懸液的方法進行造模,然后對甲亢陰虛小鼠進行給藥30d治療后,與甲亢模型組比較,因寧片低、中、高組小鼠體重、cGMP水平、常壓耐缺氧時間、負重游泳時間、游泳后肝

15、糖原含量與模型組比較均顯著增加(P<0.05),甲狀腺臟器系數(shù)、肝臟臟器系數(shù)、cAMP水平及cAMP/cGMP比值則顯著下降(P<0.05)。
　　 結論
　　 1.通過正交試驗設計優(yōu)選出的因寧片制劑工藝A1B2C2(即提取時加水量為藥材的12倍,提取時間分別為3,2,2h,浸泡時間為1.0h)合理,穩(wěn)定,可行,且在保證藥品質量的前提下,節(jié)約了能源,降低了生產(chǎn)成本,提高了經(jīng)濟效益。
　　 2.通過對小鼠各項指標的