APS患者血清對HUVEC粘附分子表達的影響及氟伐他汀干預作用.pdf

1、目的:探討抗磷脂綜合征(APS)患者血清對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)細胞間粘附分子-1(ICAM-Ⅰ)、E選擇素(E-selectin)、血管內(nèi)皮細胞粘附分子(VCAM-1)表達的影響及氟伐他汀的干預作用與機制。
　　 方法:采用酶消化法原代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞,倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài),通過Ⅷ因子免疫熒光法對培養(yǎng)細胞進行鑒定。選擇生長良好的第3-4代細胞用于實驗。分為(1)空白對照組:1640培養(yǎng)基；(2)APS濃

2、度組:不同濃度的APS患者血清(10％、25％、50％、100％)培養(yǎng)細胞24h；(3)氟伐他汀濃度組:濃度為50％的APS患者血清加不同濃度氟伐他汀(2.5、5和10μmol／L)培養(yǎng)細胞24小時。甲羥戊酸組:濃度為50％的APS患者血清加不同濃度氟伐他汀(2.5、5和10μmol／L)和0.2mmol／L的甲羥戊酸培養(yǎng)m5VEC24小時。各培養(yǎng)瓶中的細胞,經(jīng)藥物干預后收集細胞及培養(yǎng)上清液,采用RT-PCR技術測定細胞中的ICAM-Ⅰ

3、、E-selectin、VCAM-1mRNA水平表達,抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測上清液中水平,Western-blot免疫印跡法檢測各組細胞NF-кBp65含量。
　　 結果:
　　 1.正常細胞生長良好,呈扁平多角形,邊界清楚,胞質(zhì)豐富,核圓形或橢圓形,隨細胞密度增加呈現(xiàn)“鋪路石樣”排列；免疫熒光法證實內(nèi)皮細胞特異Ⅷ因子相關抗原表達陽性。
　　 2.不同濃度的APS患者血清培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細

4、胞后,培養(yǎng)上清中(ICAM-Ⅰ)、E-selectin、VCAM—1濃度及ICAM-Ⅰ、E-selectin、VCAM-1mRNA明顯高于空白對照組,并呈濃度依賴性(P<0.05)。
　　 3.加入不同濃度的氟伐他汀干預,培養(yǎng)上清中的ICAM-Ⅰ、E-selectin、VCAM-1濃度、細胞中ICAM-Ⅰ、E-selectin、VCAM-1mRNA水平呈濃度依賴性下降,NF-кBp65含量變化趨勢與各粘附分子濃度變化趨勢一致(P

5、<0.05)。
　　 4.加入甲羥戊酸后培養(yǎng)上清中的ICAM-Ⅰ、E-selectin、VCAM-1濃度、細胞中ICAM-Ⅰ、E-selectin、VCAM-1mRNA水平、NF-кBp65含量與50％APS患者血清組無明顯差異。
　　 結論:
　　 1.APS患者血清可以誘導HUVEC表達ICAM-Ⅰ、E-selectin及VCAM-1。
　　 2.氟伐他汀可以抑制APS患者血清誘導的ICAM-Ⅰ、E-