基于氧化還原滴定檢測血清抗氧化能力及其與HLA-DQB1多態(tài)性的關(guān)聯(lián).pdf

1、目的:本文基于氧化還原滴定，建立了四種測定人體血清中抗氧化能力的方法，為抗氧化能力的檢測以及與抗氧化能力有關(guān)的疾病的診斷、治療及預(yù)防提供可靠的依據(jù);同時還觀察了老年人抗氧化能力、免疫功能以及臨床常用生化指標的變化，并在分子水平上研究HLA-DQB1基因多態(tài)性與人體抗氧化能力的關(guān)聯(lián)。
　　 方法:
　　 1.在經(jīng)典的高錳酸鉀滴定法的基礎(chǔ)上進行改進，分別創(chuàng)建了在96-微孔板以及在瓊脂介質(zhì)中測定血清中抗氧化能力的方法，并在稀釋

2、實驗、重復(fù)性實驗以及臨床標本的檢測中驗證這兩種方法的準確性以及潛在的臨床運用價值。
　　 2.在經(jīng)典的碘量法基礎(chǔ)上進行改進，分別建立了在96-微孔板以及在瓊脂介質(zhì)中測定血清中與碘單質(zhì)反應(yīng)的抗氧化劑的抗氧化能力的方法，并在稀釋實驗、重復(fù)性實驗以及臨床標本的檢測中驗證這兩種方法的準確性和潛在的臨床運用價值。
　　 3.隨機選擇六份血清，并配制六種蛋白溶液，其濃度與血清中蛋白濃度相近，用以上新建立的四種方法分別測定這六份血清以

3、及六份蛋白溶液的抗氧化能力，驗證這四種方法是否可以測定出血清抗氧化劑中的有機部分（蛋白）。
　　 4.在醫(yī)院的健康體檢者中選取75歲以上的老年人血清，同時選取25-35歲之間的年輕體檢者血清，分別用我們建立的四種方法測定兩組人群中抗氧化能力的大小，并同時檢測四種天然抗體（抗卵清蛋白抗體、抗淀粉多糖抗體、抗魚精蛋白抗體和抗傷寒多糖抗體）、臨床常用生化指標（谷丙轉(zhuǎn)氨酶、r-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、總蛋白、白蛋白、白球比

4、、尿素、肌酐、葡萄糖、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白）在兩組人群中的差異，并分析抗氧化能力的大小與天然抗體的含量以及常用臨床生化指標是否有關(guān)聯(lián)。
　　 5.同時采集上述兩組人群的全血標本，采用PCR-SSP技術(shù)檢測兩組人群中的HLA-DQB1等位基因，分析HLA-DQB1等位基因與抗氧化能力的關(guān)聯(lián)。
　　 結(jié)果:
　　 1.新建立的高錳酸鉀微量板滴定法測定血清中抗氧化能力，其血清稀釋實驗具有良好的

5、線性關(guān)系，重復(fù)性實驗中，批內(nèi)穩(wěn)定性實驗的CV值為0.929％，批間穩(wěn)定性實驗的CV值為0.692％，表示該方法具有良好的穩(wěn)定性;用本法測定的血清總抗氧化能力，老年組明顯低于年輕組，且具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2.新建立的在瓊脂介質(zhì)中運用高錳酸鉀滴定法測定血清總抗氧化能力，其血清稀釋實驗具有良好的線性關(guān)系，在重復(fù)性實驗中，批內(nèi)穩(wěn)定性實驗CV值為2.246％，批間穩(wěn)定性實驗CV值為5.350％，表明該方法具有良好的穩(wěn)定

6、性;用本法測定的血清總抗氧化能力，老年組明顯低于年輕組，且具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3.新建立的在微板中測定血清中與碘單質(zhì)反應(yīng)的物質(zhì)的抗氧化能力，其血清稀釋實驗具有良好的線性關(guān)系，在重復(fù)性實驗中，批內(nèi)穩(wěn)定性實驗CV值為3.329％，批間穩(wěn)定性實驗CV值為7.219％，表明該方法具有良好的穩(wěn)定性;用本法測定的血清總抗氧化能力，老年組明顯低于年輕組，且具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 4.新建立的在瓊脂介

7、質(zhì)中測定血清中與碘單質(zhì)反應(yīng)的物質(zhì)的抗氧化能力，其血清稀釋實驗具有良好的線性關(guān)系，在重復(fù)性實驗中，批內(nèi)穩(wěn)定性實驗的CV值為3.942％，批間穩(wěn)定性實驗CV值為22.390％;用本法測定的血清總抗氧化能力，老年組明顯低于年輕組，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 5.新建立的四種方法主要測定血清抗氧化系統(tǒng)中的蛋白成分，且蛋白成分在血清抗氧化能力中發(fā)揮主要作用。
　　 6.四種方法測定的老年組血清抗氧化能力明顯低于青年組血

8、清抗氧化能力，p值小于0.05，;四種天然抗體（抗卵清蛋白抗體、抗淀粉抗體、抗傷寒多糖抗體以及抗牛血清白蛋白抗體）在老年組血清中明顯升高，p值均小于0.05，有顯著差異;常用臨床生化指標檢測中，總蛋白，白蛋白，白球比老年組相較于青年組明顯降低，谷草轉(zhuǎn)氨酶，乳酸脫氫酶，尿素，葡萄糖，甘油三酯，總膽固醇老年相較于青年組明顯升高(P＜0.05)
　　 7.在相關(guān)性分析中，我們發(fā)現(xiàn)抗氧化能力的大小與天然抗體的含量無顯著性差異;抗氧化能力