地黃調(diào)節(jié)AQP2效應(yīng)與其改善微炎癥狀態(tài)（熱瘀）的關(guān)系研究.pdf

1、研究背景：
　　糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）是一組以慢性血清葡萄糖水平增高為特征的代謝性疾病[1]，由胰島素分泌和(或)作用異常所導(dǎo)致，嚴(yán)重威脅人類健康。DM患者長期的高血糖使疾病逐漸進(jìn)展，到 DM后期，人類機(jī)體產(chǎn)生一系列的并發(fā)癥，并最終導(dǎo)致眼、腎、心臟、血管等多種組織器官慢性進(jìn)行性改變，甚至多種臟器功能減退甚至衰竭。其中糖尿病腎?。―iabetic nephropathy，DN）已經(jīng)逐漸成為糖尿病終末期最主

2、要危險(xiǎn)因素之一[1]。近來有研究結(jié)果提示2型糖尿?。═2DM）患者中存在微炎癥反應(yīng)狀態(tài)（Micro inflammatory state）[2]，是一種先天免疫和低度慢性炎癥性疾病的過程。Pick等[3]的研究認(rèn)為DM是一種低度炎癥和自然免疫性疾病，并且提出了T2DM存在著細(xì)胞因子介導(dǎo)的急性時(shí)相反應(yīng)假說。所謂“微炎癥狀態(tài)”有別于病原微生物等引起的感染，也不同于全身炎癥反應(yīng)綜合征（ systemic inflammatory respon

3、se syndrome, SIRS），SIRS是指患病機(jī)體受到多種因素（微生物、內(nèi)毒素、化學(xué)物質(zhì)、免疫復(fù)合物、補(bǔ)體等）刺激而引起的，以促炎癥因子的釋放為中心的炎性反應(yīng)，它的主要臨床表現(xiàn)為全身血液循環(huán)充盈水平減低、炎性因子持續(xù)的升高，該反應(yīng)能夠促進(jìn)糖尿病及相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。近期以來炎性細(xì)胞因子在 DN發(fā)生、發(fā)展過程中的作用逐漸受到大家的關(guān)注，長期體內(nèi)的微炎癥狀態(tài)和機(jī)體免疫功能的紊亂可能是 DN重要的發(fā)病機(jī)制之一?？梢?DN的進(jìn)展及

4、惡化，可同時(shí)促進(jìn)心血管病變、營養(yǎng)不良、神經(jīng)變性等多種并發(fā)癥的發(fā)生，是影響 DM患者病情預(yù)后的主要因素之一；因此，加強(qiáng) DN微炎癥狀態(tài)發(fā)病機(jī)制及相關(guān)治療的方面的研究有重要的臨床意義。
　　DM病程日久，炎癥因子持續(xù)升高，患者體內(nèi)往往會(huì)存在血瘀的現(xiàn)象，面色常黎黑晦暗，舌質(zhì)呈暗紫色。可依據(jù)涼血活血法的原則來辨治糖尿病，以改善 DM患者機(jī)體的微炎癥狀態(tài)。
　　地黃（RehmanniaRoot）為玄參科植物，是一味傳統(tǒng)中藥，常用其塊根

5、，主產(chǎn)于河南、懷慶等地，作為“涼血活血”的代表藥物，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，關(guān)于其藥性文中介紹到：“主折跌絕筋，傷中，逐血痹，填骨髓，長肌肉，作湯除寒熱集聚，除痹，生者尤良”。現(xiàn)代研究證實(shí)，地黃可以降低血糖，控制糖尿病，對(duì)于DM具有良好療效。
　　為進(jìn)一步研究地黃對(duì)微炎癥的治療作用及其效應(yīng)機(jī)制，我們用高糖高脂飼料喂養(yǎng)加腹腔注射鏈尿佐菌素（STZ）破壞胰島細(xì)胞的方法構(gòu)建糖尿病大鼠模型。分別給予丹參、地黃、格列本脲灌胃治療，每日一次，連

6、續(xù)60日。應(yīng)用血糖儀動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血糖，ELLSA法檢測(cè)血清中超敏 C反應(yīng)蛋白（Hs-CRP）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）以及白細(xì)胞介素6（IL-6）的濃度變化情況，免疫組織化學(xué)法、病理學(xué)等研究手段以觀察地黃對(duì)血糖及糖尿病微炎癥狀態(tài)的改善效果，探討地黃對(duì)糖尿病微炎癥狀態(tài)的改善作用及其機(jī)制，同時(shí)研究了地黃對(duì)糖尿病大鼠腎臟 AQP2表達(dá)的調(diào)節(jié)作用?，F(xiàn)將研究結(jié)果匯報(bào)如下：
　　目的：
　　1、應(yīng)用高糖高脂飼料喂養(yǎng)加鏈尿佐菌素（STZ）

7、腹腔注射的方法制作糖尿病大鼠模型。
　　2、糖尿病時(shí)存在微炎癥狀態(tài)，研究地黃對(duì)微炎癥狀態(tài)是否存在改善作用。
　　3、研究地黃對(duì)于糖尿病大鼠的腎臟組織損傷有是否有改善作用。
　　方法：
　　60只SD雄性大鼠隨機(jī)分為兩組，正常組10只，模型組50只，模型組采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)加鏈尿佐菌素（STZ）腹腔注射（40mg/kg）。造模成功的大鼠再分為：糖尿病模型組、西藥組、丹參組、地黃組。觀察各組大鼠體重、精神、毛發(fā)、四

8、肢活動(dòng)等基本狀態(tài)，定期檢測(cè)大鼠血糖、尿糖確認(rèn)糖尿病模型造模成功；ELISA法檢測(cè)大鼠血清中白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、超敏C反應(yīng)蛋白（Hs-CRP）的含量；HE染色法觀察腎臟病理形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　應(yīng)用高糖高脂飼料喂養(yǎng)加鏈尿佐菌素（STZ）腹腔注射的方法完成了糖尿病大鼠造模成功；地黃可以顯著降低糖尿病大鼠的血糖水平，減少大鼠血清中TNF-α、Hs-CRP、IL-6含量；腎臟組織HE染色可

9、以看到，正常組大鼠的腎小球結(jié)構(gòu)清晰，基底膜完整，腎臟間質(zhì)未見到炎細(xì)胞浸潤；糖尿病模型組大鼠可見腎小球肥大，球內(nèi)紅細(xì)胞淤積，系膜區(qū)增寬，同時(shí)系膜細(xì)胞增生明顯，腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)腫脹脫落現(xiàn)象，呈空泡樣變性；地黃組大鼠腎小球內(nèi)可見微量紅細(xì)胞淤積，未見上皮細(xì)胞脫落，間質(zhì)中可見少量炎細(xì)胞浸潤。
　　結(jié)論：
　　1.應(yīng)用高糖高脂飼料喂養(yǎng)加鏈尿佐菌素（STZ）腹腔注射的方法成功建立糖尿病大鼠模型。
　　2.地黃可以有效控制糖尿病大鼠

10、血糖并改善糖尿病大鼠的微炎性狀態(tài)。
　　3.地黃可以有效改善糖尿病大鼠腎臟的損傷程度。
　　實(shí)驗(yàn)二：“涼血活血”藥地黃對(duì)糖尿病大鼠腎臟水通道蛋白（AQP2）表達(dá)的調(diào)節(jié)作用
　　目的：
　　通過地黃對(duì)于糖尿病大鼠腎組織AQP2表達(dá)的調(diào)節(jié)，探討地黃“涼血活血”的本質(zhì)。
　　方法：
　　造模及分組方法同上。用Western blot檢測(cè)方法分析各組大鼠腎組織AQP2的表達(dá)；運(yùn)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)各組大

11、鼠腎臟組織中AQP2的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　AQP2表達(dá)顯示：在腎組織中，地黃組較模型組比較AQP2表達(dá)量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　地黃對(duì)糖尿病大鼠腎組織水通道蛋白AQP2具有下調(diào)作用。
　　小結(jié)：
　　1、證實(shí)了應(yīng)用高糖高脂飼料喂養(yǎng)加鏈尿佐菌素（STZ）腹腔注射的方法可成功建立糖尿病大鼠模型。
　　2、地黃可以顯著降低糖尿病大鼠的血糖。
　　3、涼血活血藥地黃可