清潤(rùn)方對(duì)糖尿病的治療作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、隨著我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人民生活方式改變，體力活動(dòng)減少以及肥胖的增加等因素導(dǎo)致糖尿病患病人數(shù)驟增。2010年《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)文指出中國(guó)20歲以上成人糖尿病的患病率高達(dá)9.7％，糖尿病前期的患病率達(dá)15.5％，已成為嚴(yán)重危害群眾健康的公共健康問(wèn)題。中醫(yī)藥一直在糖尿病的防治方面做著積極的努力，中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院林蘭教授歷經(jīng)40余年臨床與科研創(chuàng)立的糖尿病中醫(yī)三型辨證理論(陰虛熱盛、氣陰兩虛、陰陽(yáng)兩虛)，客觀的反應(yīng)了糖尿病中醫(yī)證型的

2、動(dòng)態(tài)演變規(guī)律，有效地指導(dǎo)了糖尿病中醫(yī)治療的臨床實(shí)踐。清潤(rùn)方(由知母、黃柏、酒大黃等組成)專為糖尿病早期的陰虛熱盛型而設(shè)，以滋陰清熱法治療糖尿病早期陰虛熱盛患者臨床療效顯著。本研究以清潤(rùn)方為研究對(duì)象，利用糖尿病模型大鼠觀察了不同劑量清潤(rùn)方對(duì)糖尿病大鼠糖代謝的影響，并從脂代謝、肝臟炎癥與氧化應(yīng)激、骨骼肌糖代謝關(guān)鍵基因mRNA表達(dá)等方面探討了其發(fā)揮作用可能的機(jī)制，以期為清潤(rùn)方在糖尿病治療中的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)與數(shù)據(jù)支撐。
　　1.文獻(xiàn)

3、綜述：本部分分別從糖尿病與胰島素抵抗的關(guān)系、胰島素抵抗相關(guān)機(jī)制(脂代謝紊亂、炎癥與氧化應(yīng)激、骨骼肌胰島素抵抗)的研究現(xiàn)狀、清潤(rùn)方組方原理與方中單味中藥現(xiàn)代藥理研究及中藥治療糖尿病研究進(jìn)展等方面對(duì)本研究依托的研究基礎(chǔ)進(jìn)行了綜述。
　　2.實(shí)驗(yàn)研究：包括以下四個(gè)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)。
　　2.1清潤(rùn)方對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠糖代謝及胰腺病理學(xué)形態(tài)的影響
　　目的：觀察清潤(rùn)方對(duì)糖尿病大鼠糖代謝及胰腺病理學(xué)形態(tài)的影響。
　　方法：利用鏈脲

4、佐菌素(streptozotocin，STZ)聯(lián)合高糖高脂飼料的方法建立糖尿病大鼠模型。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為空白對(duì)照組、模型組、清潤(rùn)方小、中、大劑量組(0.5，1，2 g·kg-1·d-1)、二甲雙胍組(150mg·kg-1·d-1)，各治療組分別灌胃給予相應(yīng)藥物治療。干預(yù)治療4周后檢測(cè)各組大鼠體重、空腹血糖(FBG)、血清胰島素水平、口服糖耐量曲線下面積(AUC)，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(ISI)與胰島素抵抗指數(shù)(IRI)，光鏡、電鏡下觀察胰腺

5、病理形態(tài)學(xué)改變。
　　結(jié)果：清澗方中、大劑量組和二甲雙胍組較模型組FBG降低(P<0.05)；清潤(rùn)方各劑量組和二甲雙胍組AUC均有不同程度的降低(P<0.05)；清潤(rùn)方中、小劑量組和二甲雙胍組較模型組ISI升高，胰島素抵抗指數(shù)IRI降低(P<0.05)；清潤(rùn)方中、小劑量組和二甲雙胍組肝糖原含量升高(P<0.05)；光鏡下顯示清潤(rùn)方中、大劑量組及二甲雙胍組胰島數(shù)目的減少有所好轉(zhuǎn)，雖大部分胰島體積明顯縮小，仍可見(jiàn)較大的胰島；電鏡下清潤(rùn)

6、方各劑量組及二甲雙胍組胰島β細(xì)胞內(nèi)分泌顆粒較模型組增多。
　　結(jié)論：清潤(rùn)方有降低糖尿病大鼠血糖的作用，其機(jī)制與改善糖尿病大鼠的胰島素抵抗，保護(hù)胰島功能，促進(jìn)糖尿病大鼠對(duì)葡萄糖的利用及肝糖原的合成有關(guān)。
　　2.2清潤(rùn)方對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠脂代謝及肝臟病理學(xué)形態(tài)的影響
　　目的：觀察清潤(rùn)方對(duì)糖尿病大鼠脂代謝及肝臟病理形態(tài)學(xué)的影響，探討其在脂代謝方面改善胰島素抵抗的作用。
　　方法：各組大鼠藥物干預(yù)4周后取大鼠血清及肝

7、臟組織，全血自動(dòng)生化分析儀COD-PAP法測(cè)定總膽固醇(TCHO)，GPO-PAP法測(cè)定三酰甘油(TG)，清除法測(cè)定高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)與低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)；銅顯色法測(cè)定血清游離脂肪酸水平；光鏡下觀察肝臟病理形態(tài)學(xué)改變。
　　結(jié)果：與模型組比較，清潤(rùn)方中、大劑量組糖尿病大鼠的TCHO、LDL-C水平降低(P<0.05)，清潤(rùn)方各劑量組和二甲雙胍組糖尿病大鼠的HDL-C水平升高(P<0.05)，TG水平有降

8、低趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；清潤(rùn)方中、小劑量組和二甲雙胍組大鼠血清游離脂肪酸水平降低(P<0.05)；光鏡下顯示清潤(rùn)方中、大劑量組和二甲雙胍組對(duì)肝臟的脂肪沉積有改善作用。
　　結(jié)論：清潤(rùn)方有改善糖尿病大鼠脂代謝紊亂，抑制脂肪在肝臟沉積的作用。清潤(rùn)方對(duì)糖尿病大鼠“脂毒性”的改善是其發(fā)揮抗糖尿病大鼠胰島素抵抗的機(jī)制之一。
　　2.3清潤(rùn)方對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠肝臟炎癥及氧化應(yīng)激的影響
　　目的：觀察清潤(rùn)方對(duì)糖尿病大鼠肝臟炎癥反應(yīng)及氧

9、化應(yīng)激的影響，探討其對(duì)肝臟胰島素抵抗的作用機(jī)制。
　　方法：各組大鼠藥物干預(yù)4周后取大鼠肝臟組織，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法測(cè)定肝臟組織腫瘤壞死因子α(TNF-α)及白細(xì)胞介素6(IL-6)含量；比色法測(cè)定肝臟組織丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。
　　結(jié)果：與模型組比較，清潤(rùn)方各劑量組肝組織TNF-α水平降低(P<0.05)，清潤(rùn)方小、大劑量組肝組織IL-6水平降低(P<0.05)，清潤(rùn)方中劑量組肝組

10、織IL-6水平有降低趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；清潤(rùn)方中、小劑量組及二甲雙胍組肝臟組織MDA含量降低(P<0.05)，清潤(rùn)方中、大劑量組肝臟組織SOD活性提高。
　　結(jié)論：清潤(rùn)方有降低肝臟組織炎癥因子含量，促進(jìn)氧自由基清除，減輕組織損傷的作用?？刂坡匝装Y和減少氧化應(yīng)激的損傷是清潤(rùn)方改善肝臟胰島素抵抗的重要機(jī)制。
　　2.4清潤(rùn)方對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠骨骼肌GLUT-4、INSR mRNA表達(dá)的影響
　　目的：觀察清潤(rùn)方對(duì)糖尿病

11、大鼠骨骼肌GLUT-4、INSR mRNA表達(dá)的影響，探討其對(duì)外周胰島素抵抗中骨骼肌胰島素抵抗的作用機(jī)制。
　　方法：各組大鼠藥物干預(yù)4周后無(wú)菌條件下，取左后腿骨骼肌組織，利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)骨骼肌組織GLUT-4、INSR mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：與模型組相比，清潤(rùn)方中、大劑量組和二甲雙胍組GLUT-4 mRNA表達(dá)升高(P<0.05)，INSR mRNA表達(dá)雖有升高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：

12、清潤(rùn)方上調(diào)糖尿病大鼠骨骼肌GLUT-4mRNA表達(dá)，促進(jìn)糖尿病大鼠骨骼肌對(duì)葡萄糖的利用，是其發(fā)揮改善糖尿病大鼠外周組織骨骼肌胰島素抵抗的作用機(jī)制之一。
　　綜上所述，本研究顯示清澗方有降低實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠血糖、改善胰島素抵抗、保護(hù)胰島功能的作用，其發(fā)揮作用的機(jī)制可能與改善實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠的脂代謝，減輕脂毒性；控制肝臟慢性炎癥和減少氧化應(yīng)激的損傷改善肝臟胰島素抵抗；上調(diào)骨骼肌組織GLUT-4 mRNA表達(dá)，促進(jìn)糖尿病大鼠骨骼肌對(duì)葡萄