AP-2α在動脈粥樣硬化和HeLa細胞凋亡中的作用.pdf

1、第一部分轉錄因子AP-2α通過直接調(diào)節(jié)CD36參與動脈粥樣硬化 目的：轉錄因子激活蛋白-2α(AP-2α)在發(fā)育、分化和腫瘤過程中調(diào)節(jié)細胞型別的特異性基因的表達，但迄今為止，還未見AP-2α在動脈粥樣硬化中發(fā)揮作用的相關報道。目前的研究在于探討AP-2α通過直接調(diào)節(jié)CD36基因在動脈粥樣硬化的泡沫細胞形成中發(fā)揮的潛在作用。 方法：本研究應用免疫組化和雙免疫熒光染色檢測AP-2α在apoE-/-小鼠和人動脈粥樣硬化病變的表

2、達；相對定量PCR、westernblot和免疫熒光染色檢測AP-2α對大鼠血管平滑肌細胞表達CD36的影響；油紅O染色和高效液相色譜分析法測量大鼠血管平滑肌細胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積；螢光素酶分析試驗、電泳遷移率變動分析試驗和染色質(zhì)免疫沉淀法用于證明AP-2α對CD36基因啟動子的直接調(diào)節(jié)。 結果：AP-2α主要在apoE-/-小鼠和人動脈粥樣硬化病變的泡沫細胞內(nèi)高表達。AP-2α上調(diào)大鼠血管平滑肌細胞CD36基因的mRNA和蛋白表達并

3、促進大鼠血管平滑肌細胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積。AP-2α過表達能增強CD36基因啟動子活性，在CD36基因啟動子區(qū)域存在兩個AP-2結合位點，突變這兩個結合位點能削弱AP-2α對CD36基因啟動子活性的增強效應。 結論：AP-2α通過直接調(diào)控CD36基因的表達來增加細胞對脂質(zhì)的攝取，從而在動脈粥樣硬化的形成中發(fā)揮了作用。 第二部分轉錄因子AP．2a參與多沙唑嗪誘導的HeLa細胞凋亡 目的：研究α1-腎上腺素受體拮抗劑多沙唑

4、嗪對HeLa細胞凋亡的影響以及轉錄因子AP-2α在多沙唑嗪誘導的HeLa細胞凋亡中發(fā)揮的作用。 方法：不同濃度的多沙唑嗪處理HeLa細胞16 h，通過DNA片斷形成分析、Hoechst 33258染色和流式分析檢測多沙唑嗪對HeLa細胞凋亡的影響；以相對定量PCR和Westem blot分析檢測AP-2α和caspase-3的表達。以AP-2α過表達質(zhì)?；蚍戳xAP-2α寡核苷酸分別轉染HeLa細胞后，通過流式檢測凋亡效應；相對定

5、量PCR和Western blot分析檢測AP-2α和caspase-3的表達；比色法檢測caspase-3的酶活性。 結果：多沙唑嗪以劑量依賴性方式增加HeLa細胞的凋亡率和總細胞死亡率，并以劑量依賴性方式上調(diào)AP-2α和caspase-3的表達，caspase-3的活性也呈劑量依賴性方式增長。AP-2α的過表達導致多沙唑嗪誘導的HeLa細胞的凋亡率和總細胞死亡率增加，而反義AP-2α卻導致多沙唑嗪誘導的HeLa細胞的凋亡率和