RANTES在顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生中的作用研究.pdf

1、腦血管疾病是當(dāng)今世界上威脅人類最嚴(yán)重的疾病之一,具有高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率、高復(fù)發(fā)率和并發(fā)癥多的特點(diǎn),對(duì)國(guó)民健康形成了極大的威脅。在我國(guó),目前其發(fā)病率和死亡率已超過腫瘤而躍居第一。代謝綜合征(metabolic syndrome,MetS)已被公認(rèn)為是一種糖尿病前期癥候群和心血管病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,其與腦卒中的關(guān)系成為近年來研究的熱點(diǎn)。因此我們對(duì)重慶市主城區(qū)渝北、渝中區(qū)和高新區(qū)6個(gè)社區(qū)募集2,173例45歲以上居民進(jìn)行顱內(nèi)外動(dòng)脈硬化

2、性血栓性腦卒中以及出血性腦卒中事件隨訪研究,并分析其與代謝綜合征相關(guān)危險(xiǎn)因素的關(guān)系。
　　 顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化是引起缺血性腦卒中的病變基礎(chǔ),是引起腦血管疾病的首要原因,因此對(duì)顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化的研究顯得尤為迫切。大量流行病研究證實(shí)動(dòng)脈粥樣硬化是一個(gè)血管壁慢性炎癥性疾病,趨化因子在這一過程中發(fā)揮了重要作用。特別是受激活調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(regulated activation normal T cell exoress

3、edand secreted,RANTES),參與了動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生過程中的兩個(gè)關(guān)鍵階段:趨化淋巴細(xì)胞向內(nèi)皮管壁粘附和誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞穿內(nèi)皮遷移。并且有研究表明,RANTES編碼基因的兩個(gè)啟動(dòng)子位點(diǎn)多態(tài)性-408G/A和-28C/G和冠狀動(dòng)脈性疾病有關(guān)。由于動(dòng)脈粥樣硬化是全身性疾病,顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化和冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生具有類似的機(jī)理?；诖?我們推測(cè)RANTES基因多態(tài)性和顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生也有相關(guān)性。
　　 為明確RANT

4、ES表達(dá)水平以及啟動(dòng)子基因多態(tài)性和顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系,我們?cè)诒狙芯恐?首先觀察了顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血RANTES的表達(dá)情況并分析了RANTES和其它動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)因素之間的關(guān)系;然后通過焦磷酸測(cè)序法檢測(cè)RANTES基因多態(tài)性,分析RANTES基因多態(tài)性與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系;最后,我們?cè)谕妙i動(dòng)脈粥樣硬化模型中,通過拮抗RANTES的作用來觀察對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的影響,進(jìn)一步探討驗(yàn)證RANTES對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化炎性過程的作用。

5、主要結(jié)果和結(jié)論如下:
　　 1.腦卒中與代謝綜合癥相關(guān)危險(xiǎn)因素的臨床研究
　　 本部分研究我們首先對(duì)重慶主城區(qū)2173例45歲以居民進(jìn)行卒中流行病學(xué)隨訪調(diào)查,并分析卒中和代謝綜合征相關(guān)危險(xiǎn)因素之間的關(guān)系,得出主要結(jié)論如下:(1)本研究共計(jì)2173例研究對(duì)象,平均隨訪時(shí)間4.58年,隨訪期間共有82例卒中發(fā)生,其中缺血性卒中發(fā)病率分別為男性4.89/1000人·年,女性4.70/1000人·年;出血性卒中分別為2.24/1

6、000人·年和3.19/1000人·年;(2)根據(jù)最新的ATPⅢ診斷標(biāo)準(zhǔn),代謝綜合征總患病率分別為男性19％,女性26％。代謝綜合征人群中卒中危險(xiǎn)因素的患病率存在性別差異(3)代謝綜合征以及其危險(xiǎn)因素組件數(shù)是卒中事件的危險(xiǎn)因素,隨著代謝綜合征危險(xiǎn)因素組件數(shù)的增加,缺血性和出血性卒中的發(fā)病率隨之增加,5年幸存率逐漸降;(4)cox回歸分析提示,隨著代謝綜合征危險(xiǎn)因素不同組件數(shù)的增加,缺血性和出血性卒中HR值均顯著增加;腹型肥胖是缺血性卒中

7、最重要的危險(xiǎn)因素組件,其次是代謝綜合征本身;對(duì)于出血性卒中高血壓HR值最高,其次是腹型肥胖。
　　 2.RANTES在顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化外周血表達(dá)增高。
　　 采用病例對(duì)照研究的方法,對(duì)大坪醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科178例顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化患者以及178例年齡、性別匹配的健康對(duì)照者外周血RANTES的表達(dá)水平進(jìn)行ELISA法檢測(cè)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)RANTES在顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血的表達(dá)顯著高于對(duì)照組,兩組RANTES的平

8、均濃度分別為46.8±1.9 ng/dL和40.6±1.9 ng/dL,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p＜0.05。(2)高濃度RANTES(≥42.3ng/dl)能夠增加顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的危險(xiǎn)性,和低濃度RANTES組(＜26.3ng/dl)相比危險(xiǎn)性比值比OR=3.05,95％CI=1.98-4.68,校正其它因素后OR'=2.70,95％CI=1.81-4.03,p＜0.001,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(3)RANTES表達(dá)與許多傳統(tǒng)的顱內(nèi)外動(dòng)脈粥

9、樣硬化危險(xiǎn)因素如腰圍、CRP、TG、WBC、血小板、纖維蛋白原之間有正相關(guān),和HDL水平存在負(fù)相關(guān);(4)血清RANTES水平和CRP(r=0.341,P＜0.001)以及WBC總數(shù)(r=0.329,P＜0.001)之間存在強(qiáng)烈的正相關(guān),校正其他危險(xiǎn)因素后,這種相關(guān)依然顯著;(5)檢測(cè)RANTES表達(dá)水平有望成為預(yù)測(cè)顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化以及全身血管病變的一種簡(jiǎn)便、可靠的檢查手段。
　　 3.RANTES-403G/A和-28C/G

10、基因型分布與顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化有相關(guān)性。
　　 采用焦磷酸測(cè)序法對(duì)顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化患者RANTES-403G/A和-28C/G基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè),經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析,主要結(jié)果如下:(1)RANTES-403G/A和-28C/G兩位點(diǎn)的基因型分布在顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化組和對(duì)照組均符合Hardy-Weinberg平衡定律;(2)RANTES-403G/A基因多態(tài)性可能與顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化易感性有關(guān)聯(lián),其突變等位基因A和血清RANTES表達(dá)

11、水平增高相關(guān),-403A等位基因是顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化疾病的危險(xiǎn)因素:(3)RANTES-28C/G基因型分布與顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化的易感性有相關(guān)性,其突變的G等位基因和血清RANTES表達(dá)水平增高相關(guān),-28G等位基因是顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素;(4)-28G多出現(xiàn)在單倍體包含-403A的基因背景上,兩者對(duì)顱內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化易感性的影響存在協(xié)同作用。
　　 4.通過CCR5受體拮抗劑阻斷RANTES后,頸動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生受到影

12、響。
　　 在本部分實(shí)驗(yàn)中,我們采用血管內(nèi)皮細(xì)胞球囊損傷加高脂飼養(yǎng)法復(fù)制了兔頸動(dòng)脈粥樣硬化模型。在此基礎(chǔ),我們采用CCR5受體拮抗劑阻滯RANTES的作用,同時(shí)設(shè)置PBS陽性對(duì)照和正常組的陰性對(duì)照。主要結(jié)果如下:(1)血管內(nèi)皮細(xì)胞球囊損傷加高脂飼養(yǎng)法能夠成功復(fù)制出實(shí)驗(yàn)所需要的頸動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型;(2)CCR5受體拮抗劑能夠阻滯RANTES作用,延緩頸動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程;(3)CCR5拮抗劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的治療作用可能是通過包括