白介素-6基因多態(tài)性，慢性牙周炎和2型糖尿病之間相關(guān)性研究.pdf

1、研究目的： 本研究的目的是評估一個(gè)中國人群中IL-6基因多態(tài)性，2型糖尿病和牙周炎三者之間的關(guān)系，并作2型糖尿病和（或）牙周炎患者的牙周健康狀況及相關(guān)危險(xiǎn)因素分析。 研究方法： 所有受試者來自南方醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院（廣東省口腔醫(yī)院）、南方醫(yī)科大學(xué)附屬珠江醫(yī)院和廣州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院在2007年8月至2008年9月期間的門診病人或住院病人，以及在2008年8月由南方醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院（廣東省口腔醫(yī)院）主持的一次

2、口腔健康調(diào)查中的志愿者。 每位受試者均符合以下條件：40歲及以上年齡、至少有14顆可評估的牙（其中有4顆磨牙）、中國漢族和沒有親緣關(guān)系的個(gè)體。受試者的排除標(biāo)準(zhǔn)是：①除了2型糖尿病外已知的其它系統(tǒng)性疾病（如冠心病、肝炎、腎炎、血液性疾病等）；②3個(gè)月內(nèi)服用過抗生素；⑨1年內(nèi)接受過牙周治療；④懷孕的女性；⑤哺乳期的女性。 所有受試者被分成4組：單純慢性牙周炎組（CP）、單純2型糖尿病組（T2DM）、慢性牙周炎伴2型糖尿病組（

3、CP&T2DM）以及健康對照組。所有2型糖尿病患者由糖尿病?？漆t(yī)生診斷，他們的診斷標(biāo)準(zhǔn)與1999年世界衛(wèi)生組織推薦的標(biāo)準(zhǔn)一致。這些2型糖尿病患者都在醫(yī)院里接受糖尿病治療，他們被隨后的牙周檢查分成單純2型糖尿病組或慢性牙周炎伴2型糖尿病組。慢性牙周炎患者的診斷采用1999年牙周病分類國際研討會(huì)及第5屆歐洲牙周病學(xué)研討會(huì)決議報(bào)告所推薦的臨床標(biāo)準(zhǔn)。簡言之，中重度牙周炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)是臨床附著喪失（CAL）在30%以上的位點(diǎn)（含30%）大于或等于3

4、mm。健康對照和無慢性牙周炎的2型糖尿病患者則要求沒有牙齦炎、牙周炎的臨床表現(xiàn)，包括沒有臨床附著喪失和探診出血（BOP）位點(diǎn)，以及探診牙周袋深度（PD）大于3mm的位點(diǎn)。 每位受試者應(yīng)完成3個(gè)步驟。第一步，填寫一份問卷調(diào)查，內(nèi)容包括性別、年齡、種族、吸煙狀況、身高、體重、系統(tǒng)性疾病史、牙周疾病史和壓力；第二步，取頰粘膜脫離細(xì)胞棉拭子，在10%的受試者中取了第二支棉拭子，單獨(dú)編號(hào)，以用來實(shí)驗(yàn)質(zhì)量檢測：最后，由一名調(diào)查人員對每位受試

5、者作牙周檢查，另一名調(diào)查人員作記錄，檢查6個(gè)指數(shù)牙以及每個(gè)指數(shù)牙的六個(gè)位點(diǎn)的臨床參數(shù)來評估受試者牙周狀況，內(nèi)容包括牙周袋探診深度（PD）、臨床附著喪失（CAL）及探診出血（BOP），使用Williams探針。另外，除了第三磨牙外所有缺失牙被記錄。 采用CHELEX-100法抽提基因組DNA，分光光度計(jì)檢測DNA濃度。采用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）法測定IL-6啟動(dòng)子區(qū)-174、-572、-597單核苷

6、酸多態(tài)性位點(diǎn)的基因型，引物按參考文獻(xiàn)設(shè)計(jì)。 本研究中，為了驗(yàn)證多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）法的正確性，采用兩種方法，從不同角度加以驗(yàn)證。第一，在大約10%的受試者中，取了第二支棉拭子，這些棉拭子被單獨(dú)編號(hào)，用同樣的方法來測定IL-6-174、-572、-597單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的基因型，以評估多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）法的結(jié)果是否可重復(fù)。第二，我們在第一支棉拭子的PCR產(chǎn)物中

7、，每個(gè)位點(diǎn)每個(gè)基因型隨機(jī)抽取2個(gè)或以上的樣本，去直接測序，以驗(yàn)證多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）法是否正確。 每個(gè)位點(diǎn)中通過卡方檢驗(yàn)來檢驗(yàn)基因型的哈-溫平衡（Hardy-Weinberg equilibrium），IL-6啟動(dòng)子區(qū)-174、-572、-597單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的單倍型使用一個(gè)專業(yè)軟件（SHEsis software）來構(gòu)建。單向方差分析被用來計(jì)算連續(xù)變量（包括年齡、體重指數(shù)、失牙數(shù)、牙周袋探

8、診深度、臨床附著喪失、探診出血）的均數(shù)，其中年齡、體重指數(shù)、失牙數(shù)、牙周袋探診深度的P值使用單向方差分析來計(jì)算，臨床附著喪失、探診出血（只有兩組）的P值則通過t檢驗(yàn)來計(jì)算。t檢驗(yàn)還被用來檢驗(yàn)每組內(nèi)IL-6-572不同基因型對應(yīng)的缺牙數(shù)之間的差異，而4組間缺牙數(shù)的比較通過單向方差分析計(jì)算?？ǚ綑z驗(yàn)用來檢驗(yàn)分類變量（包括性別、吸煙、壓力、等位基因頻率、基因型分布）的差異的顯著性，其中等位基因頻率和基因型分布的兩組間的多重比較也通過卡方檢驗(yàn)來

9、完成。如果基因型分布的兩組間的多重比較發(fā)現(xiàn)差異有顯著性，則通過調(diào)整了年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙、壓力等危險(xiǎn)因素的二分類logistic回歸分析進(jìn)一步分析。P值小于0.05被認(rèn)為差異有顯著性，為了控制假陽性結(jié)果，多重比較的結(jié)果則使用一個(gè)經(jīng)Bonferroni校正的P值來評估，即P值小于0.008（0.05/6）被認(rèn)為差異有顯著性。本研究所有統(tǒng)計(jì)、圖都通過SPSS13.0來完成。 研究結(jié)果： 159位單純牙周炎患者（40-8

10、5歲）、88位單純2型糖尿病患者（40-85歲）及110位慢性牙周炎伴2型糖尿病患者（40-87歲）被選擇，135位健康個(gè)體（40-82歲）構(gòu)成對照組。 IL-6-174和-572的基因型都符合哈-溫平衡，IL-6-174位點(diǎn)表現(xiàn)出很低的等位基因頻率，在481名受試者中（有11位受試者的IL-6-174的基因型沒測出）僅發(fā)現(xiàn)兩個(gè)GC雜合子，分別在慢性牙周炎伴2型糖尿病組和慢性牙周炎組。而IL-6-597沒發(fā)現(xiàn)一個(gè)含A的變異基因

11、型。因?yàn)檫@兩個(gè)位點(diǎn)的等位基因頻率太低，所以我們放棄對他們的進(jìn)一步分析。 4種可能的單倍型只發(fā)現(xiàn)3種有效（GGG，GCG和CGG），它們的頻率分布分別是：GGG18.8%，GCG81.0%和CGG0.2%?？梢?，兩種主要的單倍型（GGG和GCG）占了3種單倍型的9996以上。因?yàn)镚CG只相當(dāng)于-572 C-allele，GGG只相當(dāng)于-572 G-allele，所以我們放棄IL-6啟動(dòng)子區(qū)單倍型的進(jìn)一步討論分析， 有關(guān)IL

12、-6-572位點(diǎn)的基因型4組間分布，我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)趨勢，即單純2型糖尿病組或單純慢性牙周炎組的CC基因型頻率（61.4%或67.9%）比健康對照組（71.6%）低，而慢性牙周炎伴2型糖尿病組的CC基因型頻率最低（54.5%）。類似的趨勢也可以在等位基因頻率上發(fā)現(xiàn)，健康對照組的C等位基因頻率最高（85.1%），單純2型糖尿病組和單純慢性牙周炎組次之（分別是79.5%和83%），慢性牙周炎伴2型糖尿病組最低（74.1%）。 4組之間的

13、基因型分布初步比較，我們通過3種模式來進(jìn)行。首先，在GG vs。GC+CC模式中我們沒有發(fā)現(xiàn)4組之間有顯著差異（x2=6.432，P=0.092），這結(jié)果表明這種模式下沒必要進(jìn)一步作兩組間的多重比較。其次，我們發(fā)現(xiàn)在GG vs。GC vs. CC模式下4組之間有顯著差異（x2=12.859，P=0.045），接著我們在這種模式下作了兩組間的多重比較，結(jié)果沒有發(fā)現(xiàn)顯著性差異。最后，在CC vs。GC+GG模式中我們發(fā)現(xiàn)4組之間有顯著差異（

14、x2=8.95，P=0.030），進(jìn)一步的多重比較我們?nèi)匀话l(fā)現(xiàn)慢性牙周炎伴2型糖尿病組與健康對照組之間的P值有顯著性（x2=7.657，P=0.006，OR=0.475，95%CI：0.279-0.808），其它兩組之間沒有發(fā)現(xiàn)顯著性差異。 4組之間的等位基因頻率初步比較，差異有顯著性（x2=10.78，P=0.013）。進(jìn)一步作兩組間的多重比較，我們還是在慢性牙周炎伴2型糖尿病組與健康對照組之間發(fā)現(xiàn)顯著性差異（x2=9.152

15、，P=0.002，OR=0.502，95%CI：0.319-0.788），其它兩組之間沒有發(fā)現(xiàn)顯著性差異。 以上基因型分布和等位基因頻率的分析結(jié)果似乎表明，IL-6-572位點(diǎn)的CC基因型和C等位基因可能是慢性牙周炎伴2型糖尿病的保護(hù)因素。然而，調(diào)整了年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙和壓力等危險(xiǎn)因素的logistic回歸分析不支持CC基因型是慢性牙周炎伴2型糖尿病的一個(gè)保護(hù)因素（B=-0.648，W=3.591，P=0.058，OR=

16、0.523，95%CI：0.268-1.022）。 牙周炎的最終結(jié)局就是失牙。盡管缺牙的原因很多，但牙周炎畢竟是成人缺牙的主要原因。我們首先分析了組間缺牙數(shù)（不分基因型）發(fā)現(xiàn)，慢性牙周炎伴2型糖尿病組和其它3組相比（健康對照組、單純2型糖尿病組和單純慢性牙周炎組）都有顯著差異（F分別是2.820、2.407和1.739，每個(gè)P<0.001）。 研究結(jié)論： 1.IL-6-572 C等位基因可能是慢性牙周炎伴2型糖尿

17、病的一個(gè)保護(hù)因素。這結(jié)論需要在其它人群進(jìn)一步驗(yàn)證。 2.含IL-6-572 G基因型的牙周炎患者可能會(huì)失去更多的牙，這結(jié)論需要進(jìn)一步驗(yàn)證。 3.慢性牙周炎患者失牙比普通人多，如果同時(shí)患有2型糖尿病，則可能失去更多的牙；2型糖尿病患者只要不患上牙周炎，其失牙數(shù)和普通人沒明顯區(qū)別，一旦合并有慢性牙周炎，其失牙數(shù)不但多于普通人，而且比單純慢性牙周炎患者還多。2型糖尿病患者加強(qiáng)口腔護(hù)理，預(yù)防牙周炎發(fā)生有重要的意義。 4.