雌激素對(duì)宮腔粘連纖維化進(jìn)程及叉頭框F2表達(dá)的影響.pdf

1、背景:
　　宮腔粘連(IUAs)是指創(chuàng)傷、感染等各種原因所致子宮內(nèi)膜基底層損傷后，宮腔部分或全部粘連。近年研究表明，子宮內(nèi)膜纖維化是IUAs的主要病理學(xué)特征，是其本質(zhì)。叉頭框F2(FoxF2)是器官發(fā)育、細(xì)胞外基質(zhì)合成、上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化中的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，參與了多種器官的纖維化過程。FoxF2在IUAs的作用尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。雌激素是存在于女性體內(nèi)的最主要性激素，在IUAs治療中常作為經(jīng)驗(yàn)性治療被臨床廣泛應(yīng)用，但因療效不一、基礎(chǔ)

2、研究缺乏，其應(yīng)用劑量仍存在廣泛爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)擬探討FoxF2在IUAs中的表達(dá)及不同濃度雌激素對(duì)IUAs纖維化進(jìn)程和FoxF2表達(dá)的影響。
　　第一章 FoxF2在宮腔粘連細(xì)胞模型中的表達(dá)及意義
　　目的:
　　探討FoxF2在IUAs細(xì)胞模型中的表達(dá)。
　　方法:
　　1.原代培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞(HESCs)。
　　2.免疫細(xì)胞化學(xué)法進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
　　3.建立IUAs細(xì)胞模型:用0和10n

3、g/ml轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)分別作用于HESCs48h作為對(duì)照組和模型組。
　　4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)和蛋白質(zhì)印跡法(WB)檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、膠原I(COLI)及FoxF2的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.原代培養(yǎng)的HESCs形態(tài)穩(wěn)定，生長(zhǎng)活性好。
　　2.免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞波形蛋白表達(dá)陽(yáng)性，且波形蛋白陽(yáng)性細(xì)胞比率高，而角蛋白18表達(dá)陰性，證實(shí)為HESCs

4、，且純度高。
　　3.與對(duì)照組相比，模型組α-SMA、COLI及FoxF2的mRNA和蛋白表達(dá)均顯著性增高（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.10ng/ml TGF-β1可誘導(dǎo)HESCs向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，引起纖維化標(biāo)志物α-SMA和COLI的表達(dá)穩(wěn)定性增加，從而建立IUAs細(xì)胞模型。
　　2.FoxF2在IUAs中高表達(dá)，提示FoxF2可能參與IUAs纖維化進(jìn)程。
　　第二章 雌激素對(duì)宮腔粘連纖維化進(jìn)

5、程及FoxF2表達(dá)的影響
　　目的:
　　探討不同濃度雌激素對(duì)IUAs纖維化進(jìn)程及FoxF2表達(dá)的影響。
　　方法:
　　1.配置10-6、10-8、10-10、10-12mol/L的雌激素工作液。
　　2.本實(shí)驗(yàn)分為5組，分別為模型組、10-6mol/L E2組、10-8mol/L E2組、10-10mol/L E2組、10-12mol/L E2組。先用10ng/ml TGF-β1作用于HESCs48h以

6、建立IUAs細(xì)胞模型，再用上述不同濃度雌激素作用于該模型中48h。
　　3.qPCR和WB法檢測(cè)α-SMA、COLI及FoxF2的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.qPCR結(jié)果:與模型組相比，10-6、10-8、10-10mol/L E2組α-SMA、COLI、FoxF2mRNA表達(dá)均下降（10-10mol/L E2組COLI:P＞0.05，其余各組P＜0.05）;10-12mol/L E2組α-SMA、COL

7、I mRNA表達(dá)上升(P＞0.05)，F(xiàn)oxF2mRNA表達(dá)下降(P＜0.05)。
　　2.WB結(jié)果:與模型組相比，10-6、10-8、10-10mol/L E2組α-SMA、COLI、FoxF2蛋白表達(dá)均下降(P＜0.05);10-12mol/L E2組α-SMA蛋白表達(dá)上升(P＞0.05)，COLI和FoxF2蛋白表達(dá)均下降(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　17β-雌二醇可在一定范圍內(nèi)下調(diào)α-SMA和COLI的表