擬南芥與核盤菌互作及與核盤菌、水稻白葉枯病菌相關(guān)的擬南芥突變體篩選.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文擬南芥與核盤菌互作及與核盤菌、水稻白葉枯病菌相關(guān)的擬南芥突變體篩選姓名：戴富明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：徐同何祖華20051201浙江人學(xué)博l論文擬南芥與核盤菌芻作垃’o接盤茼、水稻t2f，I璃蒲相關(guān)的擬南芥突，殳體篩選生的特性是一致的。該擬南芥一核盤菌互作體系能為核盤菌與其它作物問的互作分析提供研究手段，并可能加速控制這個(gè)病原菌的遺傳操作技術(shù)的建立。4木霉對(duì)核盤菌的拮抗作用通過在PSA平板上對(duì)峙培

2、養(yǎng)觀察，哈茨木霉(Trichodermaharzianum)菌絲能夠侵入核盤菌菌絲，并在病菌菌絲上形成寄生并形成大量的分生孢子。經(jīng)顯微觀察，木霉菌絲并行靠近并接觸核盤菌病菌菌絲，最后溶解菌絲，表明哈茨木霉作為生防菌對(duì)核盤菌有強(qiáng)烈的寄生作用。5農(nóng)桿菌介導(dǎo)木霉胞壁降解酶基因ThEn42轉(zhuǎn)化擬南芥通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)花期噴霧，將木霉內(nèi)切幾丁質(zhì)酶基因(ThEn42)導(dǎo)入擬南芥Col生態(tài)型中，轉(zhuǎn)化的種子經(jīng)潮霉素抗性篩選，獲得抗性幼苗11棵，轉(zhuǎn)化頻率

3、為022％，經(jīng)DNAPCR檢測(cè)，擴(kuò)增出外源基因ThEn42的特異性DNA片斷，經(jīng)Southern檢測(cè)表明目的基因己插入擬南芥植株中。6木霉胞壁降解酶基因ThEn42在擬南芥中的表達(dá)及增強(qiáng)對(duì)核盤菌的抗性經(jīng)Nothem檢測(cè)，部分轉(zhuǎn)基因的植株其轉(zhuǎn)入的外源基因能高表達(dá)，其表達(dá)量比低表達(dá)的要高數(shù)十倍。轉(zhuǎn)基因的植株當(dāng)代表現(xiàn)出不育、矮化和生長(zhǎng)發(fā)育正常等不同表型，接種油菜菌核病菌后，T1代植株對(duì)病菌抗性顯著提高。7通過EMS誘變獲得了對(duì)水稻白葉枯病菌(

4、Xanthomonasoryzaepvoryzae，Xoo)敏感的擬南芥突變體對(duì)560個(gè)通過激發(fā)標(biāo)簽技術(shù)和10萬粒左右的經(jīng)甲基磺酸乙酯(ethylmethanesulfonate，EMS)處理獲得的擬南芥哥倫比亞生態(tài)型(C010)突變?nèi)后w用核盤菌病菌接種進(jìn)行抗病性鑒定，沒有得到抗病的突變體。對(duì)20萬顆左右擬南芥(C01O)EMS誘變體庫(kù)進(jìn)行水稻白葉枯菌(Xoo一99A，Xoo一兒8，)敏感性篩選，得到一個(gè)對(duì)Xoo99A敏感的突變體99A

5、68，我們將其命名為noxl(nonhostdiseaseresistanceofXoo1)。該突變體在表型上要比野生型長(zhǎng)得矮小，主薹不明顯，側(cè)薹較多，呈散發(fā)狀，不易結(jié)莢。用Xoo99A接種后出現(xiàn)黃色病斑，但是中央不枯死。用帶報(bào)道GUS基因的X0099G2菌株對(duì)noxl突變體進(jìn)行敏感性驗(yàn)證，Xoo一99G2在接種noxl后2d接種葉片有大量病菌存在，7d后仍有病菌存活；而對(duì)照野生型擬南芥Col一0接種后2d病菌大量減少，7d后沒有發(fā)現(xiàn)活