Mir-1271及RTEF-1在青年及老年胃癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景與目的:
　　胃癌是我國胃腸道腫瘤中常見的惡性腫瘤，具有惡性程度高、易轉(zhuǎn)移和死亡率高的特點(diǎn)。因此，深入研究胃癌發(fā)病的機(jī)制從而尋找到新的早期診斷和有效的治療方法，是擺放在我國醫(yī)療工作者面前的重要問題。胃癌發(fā)病率隨患者年齡增加而升高，其發(fā)病高峰年齡為60歲左右。較之青年胃癌，老年胃癌患者表現(xiàn)出組織學(xué)分化程度高、生物學(xué)侵襲性弱、腫瘤惡性程度低的臨床特點(diǎn)。老年胃癌與青年胃癌在生物學(xué)行為上的這種差別提示兩組胃癌在各自的發(fā)病及發(fā)展過程中存

2、在著不同的分子調(diào)節(jié)機(jī)制。但是，目前尚不清楚是什么分子機(jī)制導(dǎo)致了老年胃癌具有相對低危的生物學(xué)特性。因此，研究老年和青年胃癌間存在的不同分子調(diào)節(jié)機(jī)制，有利于我們進(jìn)一步深入了解胃癌發(fā)生、發(fā)展的過程，對于胃癌的個(gè)體化預(yù)防和治療具有重要的理論指導(dǎo)意義。
　　惡性腫瘤普遍具有高度異質(zhì)性的特點(diǎn)，既往研究結(jié)果顯示：老年胃癌是胃癌患者中的一個(gè)主要患者群體，其臨床病理特征不同于青年胃癌，反映在：女性發(fā)病率顯著低、組織學(xué)分化程度高、生物學(xué)侵襲性弱、腫瘤

3、惡性度低等。且老年胃癌遺傳傾向低于青年胃癌，表現(xiàn)為有胃癌家族史的患者明顯較青年胃癌組低。分子學(xué)水平上，既往研究也發(fā)現(xiàn)老年胃癌及青年胃癌患者間的基因組譜差異，另外介導(dǎo)細(xì)胞黏附和維持細(xì)胞骨架的E-鈣黏素和β-Catein表達(dá)水平和標(biāo)志著DNA錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）等也在兩組胃癌間存在著明顯的差異。但是，前期的研究多止步于觀察到上述差異，而缺少對其內(nèi)在精確分子機(jī)制的研究。
　　RTEF-1(Related Trans

4、criptional Enhancer Factor-1，轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子-1相關(guān)基因)來自轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子家族（Transcriptional Enhancer Factor,TEF）。1996年Stewart等人從心肌細(xì)胞中首次成功克隆并編碼，隨后其家族的其他成員被不斷發(fā)現(xiàn)。目前已知該家族成員包括四個(gè)：TEF-1, RTEF-1, DTEF-1和ETF，該家族擁有一個(gè)共同的高度保守的DNA結(jié)合域，可以結(jié)合到基因啟動子M-CAT原件上發(fā)揮其調(diào)節(jié)

5、作用。RTEF-1作為轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子家族重要的組成部分，既往的研究多集中于其在內(nèi)皮細(xì)胞和血管生成中的調(diào)節(jié)作用。Che P等人既往的研究結(jié)果證實(shí)了Mir-125a-5p通過下調(diào) RTEF-1可以導(dǎo)致老年小鼠血管生成障礙。鑒于血管生成和腫瘤的密切關(guān)系，近來 RTEF-1在腫瘤形成中的作用同樣引起了關(guān)注。我們提出假設(shè)：RTEF-1及相關(guān)調(diào)控因子在老年胃癌及青年胃癌中的表達(dá)是否存在差異，這種差異是否與老年胃癌和青年胃癌間的組織學(xué)分化程度、生物學(xué)侵襲

6、性及腫瘤惡性程度的不同有關(guān)。
　　目的：
　　探討RTEF-1及其上游調(diào)控基因在老年胃癌及青年胃癌中的表達(dá)是否存在差異及其意義。
　　材料與方法:
　　1.研究對象及標(biāo)本采集：標(biāo)本采集于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃腸外科2014年7月至2015年1月期間進(jìn)行胃癌根治術(shù)的患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前胃鏡病理提示為胃惡性腫瘤，計(jì)算機(jī)斷層掃描(computed tomography, CT)等檢查進(jìn)行術(shù)前分期，提示患者可以行標(biāo)準(zhǔn)胃癌

7、根治術(shù)，術(shù)后病理證實(shí)為胃癌中的低分化腺癌，術(shù)前未進(jìn)行化療，放療及中西醫(yī)結(jié)合等抗腫瘤治療。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)我院道德倫理委員會的批準(zhǔn)，而且經(jīng)過患者知情同意并簽署知情同意書。
　　2.自 Microarray數(shù)據(jù)結(jié)果中分析老年胃癌和青年胃癌中存在差異表達(dá)的miRNAs；發(fā)現(xiàn)在老年胃癌及青年胃癌中表達(dá)存在明顯差異的miRNA，RT-qPCR驗(yàn)證；
　　3.分別采用RT-qPCR、WesternBlot技術(shù)檢測RTEF-1在老年胃癌及青年胃癌

8、原代細(xì)胞中的mRNA蛋白水平表達(dá)并進(jìn)行比較。
　　4．所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。以P<0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　1．mir-1271在老年胃癌和青年胃癌中均含量豐富且變化相對明顯;
　　2．老年胃癌細(xì)胞中RTEF-1蛋白表達(dá)較青年胃癌減少；
　　3．老年胃癌細(xì)胞中mir-1271表達(dá)是青年胃癌的3.2倍；
　　結(jié)論:
　　老年胃癌及青年胃