黃芪皂苷檢測(cè)規(guī)程建立與恒山黃芪成分積累分布規(guī)律研究.pdf

1、黃芪在我國(guó)藥用歷史悠久，藥用價(jià)值極高，《藥典》收載有蒙古黃芪和膜莢黃芪兩個(gè)種。山西恒山及其周邊地區(qū)為蒙古黃芪的道地產(chǎn)區(qū)，是我國(guó)為數(shù)不多的保存了黃芪傳統(tǒng)生長(zhǎng)模式的地區(qū)。傳統(tǒng)芪較高的藥用價(jià)值自古以來就被中醫(yī)臨床所證明，然而發(fā)展至今，由于生長(zhǎng)周期長(zhǎng)和較高的成本，其國(guó)內(nèi)市場(chǎng)漸漸地被興起的“移栽”芪所搶占，主要原因之一是傳統(tǒng)芪現(xiàn)存市場(chǎng)交易的商品規(guī)格等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)是否與質(zhì)量相關(guān)尚不清楚，更無法直接對(duì)比評(píng)價(jià)兩種不同種植模式黃芪的質(zhì)量差異。對(duì)于傳統(tǒng)黃芪而言，

2、不同生長(zhǎng)年限會(huì)對(duì)黃芪的質(zhì)量產(chǎn)生哪些影響尚不完全清楚;雖然已明確黃芪根是主要藥用部位，但根的不同部位化學(xué)成分分布是否相同，也不清楚。另外，黃芪市場(chǎng)僅從規(guī)格大小劃分黃芪等級(jí)，這種劃分方式是否科學(xué)，也未得到證明。面對(duì)這些疑問，實(shí)際上就是要解決“辨狀論質(zhì)”的科學(xué)內(nèi)涵，建立中藥材的外觀性狀、化學(xué)成分和生物效應(yīng)相結(jié)合的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。面對(duì)市場(chǎng)上形形色色的黃芪藥材商品，“性狀”首先是作為區(qū)分質(zhì)量以及商品定價(jià)的依據(jù)，對(duì)于傳統(tǒng)道地黃芪而言，它們有生長(zhǎng)年限的

3、差異，這種差異不僅體現(xiàn)在不同黃芪植株上，也體現(xiàn)在同一黃芪的不同部位上。分析研究傳統(tǒng)芪中化學(xué)成分的積累規(guī)律和分布規(guī)律，不僅對(duì)于評(píng)價(jià)傳統(tǒng)黃芪的質(zhì)量非常重要，而且對(duì)于黃芪等級(jí)的區(qū)分，以及提供科學(xué)的證據(jù)為市場(chǎng)實(shí)行優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)的交易，也起到十分重要的作用。
　　目的：黃芪中的皂苷和黃酮類成分已被證明是主要活性成分，但黃芪皂苷成分的提取分離過程較為繁瑣，其最終含量是溶液堿化后多種皂苷水解生成黃芪甲苷的最終含量，其含量不僅容易受到溶液堿化程度的影響

4、，且由于其特殊的分布部位和現(xiàn)今對(duì)于該類成分檢測(cè)技術(shù)的不完善，其含量還受到黃芪的加工方式及儀器穩(wěn)定性的影響。本文主要建立黃芪取樣和皂苷類成分含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程，為黃芪質(zhì)量評(píng)價(jià)提供方法基礎(chǔ);闡明生長(zhǎng)年限對(duì)黃芪指標(biāo)成分的積累規(guī)律，為制定黃芪適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)采收年限提供科學(xué)依據(jù);明確黃芪主側(cè)根、上下根段以及根的內(nèi)外部位化學(xué)成分的分布規(guī)律，為制定黃芪產(chǎn)地加工規(guī)程和建立科學(xué)的商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。
　　方法：制定建立從采收到加工，命名全套控制流

5、程，重點(diǎn)對(duì)皂苷成分進(jìn)行分析規(guī)范，探討了三種主要影響因素，建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程;采用HPLC-UV-ELSD串聯(lián)同時(shí)測(cè)定12種成分(8種黃酮:1.毛蕊異黃酮葡萄糖苷;2.芒柄花苷;3.(6aR，11aR)-9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷;4，7，2'-二羥基-3'，4'-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷;5.毛蕊異黃酮;6.芒柄花素;7.3-羥基-9，10-二甲氧基紫檀烷;8.7，2'-二羥基-3'，4'-二甲氧基

6、異黃烷;4種皂苷:分別是黃芪皂苷Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ和Ⅰ）。色譜條件:參考課題組建立的方法，最終的洗脫條件為流動(dòng)相為乙腈(A)-水(B)，體積流量1.0mL/min，蒸發(fā)光檢測(cè)器參數(shù):空氣泵壓力為0.5MPa，氣體流速為2.5L/min，漂移管加熱溫度設(shè)為105℃，增益值為1.0，Venusil MP C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），紫外檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，柱溫25℃，進(jìn)樣量20μl。梯度洗脫:0-8min，20％A;8-15mi

7、n，30％A;15-30min，43％A;30-40min，60％A;40-50min，100％A;50-60min，100％A;60-66min，20％A。進(jìn)行方法學(xué)考察，結(jié)果穩(wěn)定可靠，得到樣本測(cè)定數(shù)據(jù);采用偏最小二乘判別分析、貝葉斯判別分析、聚類分析、相關(guān)分析、相似度評(píng)價(jià)和因子分析等數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法，研究了不同生長(zhǎng)年限黃芪中指標(biāo)成分的積累規(guī)律和指標(biāo)成分在根中不同解剖部位、上下和內(nèi)外部位的分布規(guī)律。采用相關(guān)分析和綜合評(píng)價(jià)的方式分析探討

8、了黃芪外觀性狀與指標(biāo)成分之間的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果：1.黃芪蘆頭直徑和根的長(zhǎng)度的平均值與生長(zhǎng)年限呈正相關(guān)。
　　2.黃芪藥材的粉碎程度對(duì)含量測(cè)定影響表現(xiàn)在兩方面:一是粉末取樣均勻性，二是藥材的提取效率。
　　3.黃酮類成分對(duì)照品性質(zhì)穩(wěn)定;黃芪皂苷Ⅰ在4℃存儲(chǔ)條件下緩慢水解為皂苷Ⅱ，而皂苷Ⅱ很少水解成皂苷Ⅳ。
　　4.在同一檢測(cè)條件下，紫外檢測(cè)器對(duì)同一濃度、同一種物質(zhì)，具有穩(wěn)定的響應(yīng)信號(hào)值，而蒸發(fā)光檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào)值容

9、易波動(dòng)變化。
　　5.黃芪中總黃酮和總皂苷均在生長(zhǎng)不到一年的時(shí)間內(nèi)就達(dá)到平均水平，此后總黃酮含量隨著生長(zhǎng)年限的積累波動(dòng)變化，其中生長(zhǎng)4年的黃芪總黃酮積累量達(dá)到最高;除3年生黃芪外，皂苷含量隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)含量逐漸降低，3年生黃芪總皂苷的含量達(dá)到峰值。
　　6.一株黃芪上下段生長(zhǎng)時(shí)間不同，按絕對(duì)年限能夠?qū)⒉煌M的黃芪樣本區(qū)分開，不同全植株黃芪中總黃酮和總皂苷的積累量也有明顯差異，說明總黃酮和總皂苷確實(shí)與生長(zhǎng)年限密切相關(guān)。

10、r>　　7.12種指標(biāo)成分可以分成3大類，他們之間具有不同的積累和分布規(guī)律。
　　8.一株黃芪側(cè)根與主根總黃酮含量無差異，側(cè)根總皂苷含量顯著高于主根;主根和側(cè)根的內(nèi)部生長(zhǎng)發(fā)育過程可能有所差異。
　　9.黃芪中皂苷80％以上分布在表皮，只有不到20％分布在其它解剖部位;黃酮類成分在木質(zhì)部、韌皮部和表皮均有分布，且以木質(zhì)部居多，但含量差異不大。
　　10.一株黃芪由蘆頭（上端）至根尖（下端）黃酮苷類成分分布與生長(zhǎng)年限密切相

11、關(guān);黃烷和皂苷類成分含量都是逐漸升高，但以一株黃芪的中間偏下的位置有穩(wěn)定的較高含量。其中黃烷類成分上下含量極不均勻。
　　11.傳統(tǒng)芪黃酮苷含量與密度正相關(guān);總皂苷含量與規(guī)格大小負(fù)相關(guān);形狀為鞭桿型的黃芪往往具有較高的總黃酮和總皂苷，圓柱型黃芪總黃酮和總皂苷含量最低，其次是生長(zhǎng)年限較長(zhǎng)的多叉型黃芪，直根型黃芪總黃酮和總皂苷含量居于這幾種形狀之間。
　　結(jié)論：建立的皂苷類成分檢測(cè)規(guī)范及多指標(biāo)成分測(cè)定方法可靠;恒山黃芪藥材化學(xué)成