黃芪藥材甜味與品質(zhì)關(guān)聯(lián)性研究及黃芪糖譜分析方法的建立.pdf

1、選題依據(jù)：自古以來，“味甜者佳”就是鑒別黃芪品質(zhì)的一項(xiàng)重要感官指標(biāo)，但該指標(biāo)的物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，缺乏相應(yīng)的科學(xué)研究論證其合理性。同時(shí)，2010版藥典規(guī)定，黃芪品質(zhì)評價(jià)的常用指標(biāo)為毛蕊異黃酮苷和黃芪甲苷的含量，但此指標(biāo)的評價(jià)結(jié)果與業(yè)界、實(shí)際應(yīng)用時(shí)的評價(jià)結(jié)果存在著不一致，因此，需要找到新的、更加合理的指標(biāo)評價(jià)黃芪的品質(zhì)。糖類是黃芪中主要的免疫活性成分，同時(shí)影響了黃芪的口感和品質(zhì)。而且，糖類結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣，不同的糖類具有不同的調(diào)節(jié)作用，是篩選潛在

2、指標(biāo)評價(jià)黃芪品質(zhì)的最佳來源。因而，本課題從糖類物質(zhì)入手，明確了黃芪味甜的物質(zhì)基礎(chǔ)，論證了依據(jù)黃芪甜味高低判別品質(zhì)的合理性，構(gòu)建了基于三氟乙酸（TFA）水解技術(shù)的糖譜分析方法，為尋找更加合理、科學(xué)的黃芪品質(zhì)評價(jià)指標(biāo)奠定了研究基礎(chǔ)。
　　目的：明確決定黃芪甜味的化學(xué)成分并進(jìn)行定量分析，量化黃芪藥材的甜度強(qiáng)弱，分析影響黃芪甜味強(qiáng)度的環(huán)境因素，結(jié)合黃芪常用的四項(xiàng)質(zhì)量控制指標(biāo)和綜合評價(jià)方法，論證黃芪“味甜者佳”這一傳統(tǒng)評價(jià)方法的合理性。

3、r>　　建立基于糖類成分 TFA水解技術(shù)的糖譜分析方法，并據(jù)此尋找不同栽培方式、不同種屬黃芪中差異性的糖片段，篩選差異糖片段作為潛在的質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)。
　　方法：根據(jù)甜味成分的性質(zhì)，提取對黃芪甜味有貢獻(xiàn)的化學(xué)成分進(jìn)行定性定量分析，結(jié)合現(xiàn)有的黃芪質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)，運(yùn)用綜合評價(jià)分析方法和相關(guān)性分析手段，論證味甜的合理性。
　　利用黃芪中可溶性糖類成分在不同溶劑中的溶解度差異，分級提取不同糖類組分，選擇不同濃度、溫度的 TFA水解溶液對

4、提取的糖類成分進(jìn)行完全或不完全水解，然后選擇不同的衍生化試劑，運(yùn)用 GC-MS技術(shù)、聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)實(shí)現(xiàn)對糖類片段衍生化產(chǎn)物的分離與檢測，得到具有針對性的糖類指紋圖譜組，結(jié)合相關(guān)性分析、聚類分析、代謝組學(xué)分析等數(shù)據(jù)處理手段，篩選得到潛在評價(jià)指標(biāo)。
　　結(jié)果：1.黃芪的甜味主要來源于其中游離的七種成分：葡萄糖、果糖、肌醇、山梨醇、半乳糖醇、蔗糖及甜菜堿，這七種成分的含量高低共同決定了黃芪的甜度。黃芪甜度的大小和黃芪中毛蕊異黃酮

5、苷、黃芪甲苷的含量都具有明顯的正相關(guān)性，且甜度評價(jià)與綜合評價(jià)兩種方法的結(jié)果相一致。
　　2.利用乙酰化方法結(jié)合 GC-MS檢測技術(shù)建立黃芪的單糖指紋圖譜，測定單糖類產(chǎn)物后發(fā)現(xiàn)：黃芪樣品中的糖類成分主要由葡萄糖、果糖、肌醇、山梨醇、半乳糖醇、木糖、巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖和甘露糖構(gòu)成；以黃芪中阿拉伯糖的物質(zhì)的量為1，速生黃芪中甘露糖：阿拉伯糖的比值＞3.5:1，葡萄糖：阿拉伯糖的比值＞4:1，野生黃芪中甘露糖：阿拉伯糖的比值

6、＜3.5:1，葡萄糖：阿拉伯糖的比值大于＜4:1。
　　3.利用 ANTS衍生化方法結(jié)合聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)建立黃芪的多糖指紋圖譜發(fā)現(xiàn)：黃芪可以依照栽培方式和種屬的不同得到很好的區(qū)分，分子量在540-900 Da（主要為三糖和四糖）之間的黃芪多糖片段可以區(qū)分不同栽培方式黃芪；分子量范圍在360-720 Da（二糖和三糖）之間的黃芪多糖片段可以區(qū)分不同種屬黃芪。
　　結(jié)論：1.在對黃芪甜度的貢獻(xiàn)上，蔗糖的含量高低對黃芪甜度的

7、影響最大，其次為甜菜堿，這兩種成分的含量比較高，對黃芪口感的影響作用也比較明顯。而葡萄糖、果糖、肌醇、山梨醇和半乳糖醇受到含量的限制，對黃芪甜度的影響較小。
　　2.黃芪中可溶性糖類成分的積累與植物體內(nèi)其他代謝產(chǎn)物、特別是具有藥理活性的黃酮類、萜類、皂苷類以及多糖類成分的積累具有相關(guān)性，而可溶性糖類成分含量積累的多寡，可以運(yùn)用甜度進(jìn)行表征。因此，可溶性糖類成分含量積累的多，黃芪的甜度就高，同時(shí)具有藥理活性的黃酮類、萜類成分的積累也