黃芪遺傳轉化受體系統(tǒng)的建立及aFGF轉化黃芪的研究.pdf

1、黃芪（Radix Astragali）為豆科（Leguminosae）黃芪屬（Astragalus）植物膜莢黃芪Astragalus membranaceus（Fisch．） Bge．及蒙古黃芪Astragalus membenanceus（Fisch．） Bge．Var．mongholicus（Bge．） Hsiao的干燥根。性溫，味甘，具有補氣固表，利尿托毒，斂瘡生肌，益氣補中之功效。人類酸性成纖維細胞生長因子是成纖維細胞生長因子超

2、家族成員之一。aFGF具有廣泛的生物學作用且沒有種屬特異性。aFGF具有創(chuàng)傷愈合及組織修復的功能，黃芪有補氣固表、斂瘡生肌的功效，通過農桿菌介導將aFGF基因導入黃芪中，以期獲得具有二者共同累加作用的效果，為開發(fā)黃芪在斂瘡生肌方面的外用藥奠定基礎，從而為進一步開發(fā)黃芪提供理論依據(jù)。 本試驗分別以黃芪的子葉、下胚軸、葉片、莖段、子葉節(jié)為外植體研究了黃芪植株再生的器官發(fā)生途徑，建立起黃芪的高頻再生體系。試驗結果表明子葉節(jié)為不定芽誘導

3、的最佳外植體、以保留全部子葉最佳，誘導分化培養(yǎng)基組成為MS+BA2．0mg/L+IBA0．5mg/L．芽的誘導率可達到90．3％；以下胚軸為外植體在附加BA2．0 mg/L、IBA0．5mg/L的MS培養(yǎng)基上芽的誘導率達到26％，子葉、葉片、莖段為外植體無芽的分化；誘導生根最佳培養(yǎng)基為1/2MS+NAA5．0mg/L。 在建立了黃芪高頻再生體系的基礎上，采用根癌農桿菌GV3101轉化黃芪子葉節(jié)，成功地將酸性成纖維細胞生長因子（a

4、FGF）導入黃芪。試驗中研究了篩選壓、根癌農桿菌的侵染濃度、侵染時間、共培養(yǎng)時間等因素對黃芪遺傳轉化效率的影響，實驗結果表明，外植體在MS+2．0mg/L BA+0．5mg/L IBA培養(yǎng)基上預培養(yǎng)3d，農桿菌濃度為OD600=0．3時侵染10 min后培養(yǎng)2d，轉移至含有MS+2．0mg/L BA+0．5mg/LIBA+500 mg/LCef+30mg/LKan的培養(yǎng)基誘導篩選培養(yǎng)，2個月后得到69個再生株系，經過PCR初步檢測，證實