超聲介導(dǎo)載紫杉醇及載siRNA微泡對(duì)宮頸癌Caski細(xì)胞協(xié)同抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：利用超聲介導(dǎo)載紫杉醇微泡及載siRNA微泡，進(jìn)行藥物靶向釋放，用于治療宮頸癌的實(shí)驗(yàn)研究。通過(guò)自制高分子材料PLGA為外殼，包裹紫杉醇及針對(duì)HPV16E6、E7特異性的siRNA，制備載藥、載siRNA微泡，在體外作用于宮頸癌細(xì)胞，初步評(píng)價(jià)超聲介導(dǎo)載紫杉醇及載 siRNA微泡聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸癌的協(xié)同抑制效果，為進(jìn)一步臨床應(yīng)用研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：⑴利用改良型雙乳劑揮發(fā)法和低溫真空干燥技術(shù)，自制出載紫杉醇和載siRNA的P

2、LGA超聲微泡。⑵選擇宮頸癌Caski細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使用不同濃度的紫杉醇作用于宮頸癌Caski細(xì)胞，探索其對(duì)宮頸癌Caski細(xì)胞體外抑制的最佳濃度，作為制作超聲微泡時(shí)紫杉醇的濃度標(biāo)準(zhǔn)。⑶根據(jù)siRNA的設(shè)計(jì)的基本規(guī)則，合成靶向于 HPV-16之E6、E7的 siRNA，進(jìn)而轉(zhuǎn)染宮頸癌Caski細(xì)胞，通過(guò)DAPI細(xì)胞染色確定相關(guān)siRNA對(duì)宮頸癌Caski細(xì)胞的抑制作用。⑷通過(guò)MTT比色法摸索出超聲輻照擊破本實(shí)驗(yàn)合成的PLGA微泡的時(shí)間強(qiáng)

3、度最適宜參數(shù)，作為未來(lái)實(shí)驗(yàn)超聲輻照的參數(shù)。⑸實(shí)驗(yàn)將宮頸癌Caski細(xì)胞分為四組：空白對(duì)照組、載紫杉醇微泡組、載siRNA微泡組、聯(lián)合載紫杉醇及載siRNA微泡組。按照最佳參數(shù)給予相同頻率及時(shí)間強(qiáng)度的超聲輻照，48小時(shí)后，進(jìn)行MTT試驗(yàn)，WB檢測(cè)凋亡蛋白、FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期的改變，評(píng)價(jià)超聲介導(dǎo)載紫杉醇微泡聯(lián)合載siRNA微泡對(duì)宮頸癌細(xì)胞協(xié)同抑制作用的效果。
　　結(jié)果：①通過(guò)改良型雙乳劑揮發(fā)法和真空冷凍干燥技術(shù)，制備出載紫

4、杉醇和載siRNA的PLGA超聲微泡，形態(tài)規(guī)則呈球形，粒徑分布均勻，包封率達(dá)到89.58％，載藥率達(dá)到11.86%，達(dá)到進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的要求。②使用不同濃度的紫杉醇進(jìn)行抑制宮頸癌Caski細(xì)胞增殖的體外實(shí)驗(yàn)，明確了10-6mol/L濃度的紫杉醇對(duì)宮頸癌Caski細(xì)胞體外抑制的效果最佳。③尋找并合成了靶向于 HPV-16之E6、E7的 siRNA，通過(guò)DAPI細(xì)胞染色驗(yàn)證了其對(duì)宮頸癌Caski細(xì)胞增殖有良好抑制作用。④通過(guò)MTT比色法探索超聲

5、輻照擊破本實(shí)驗(yàn)自制PLGA微泡的參數(shù)，采用頻率1.5W/cm2，輻照35s時(shí)，其效果最佳。⑤與空白對(duì)照組相比，載紫杉醇微泡組宮頸癌Caski細(xì)胞增殖受到一定程度抑制，載siRNA微泡組宮頸癌Caski細(xì)胞增殖有一定抑制，聯(lián)合載紫杉醇及載siRNA微泡組宮頸癌Caski細(xì)胞增殖的抑制作用更加明顯，其Bax、Caspase3促凋亡蛋白的表達(dá)上調(diào)明顯，Bcl2抑凋亡蛋白下調(diào)明顯，流式細(xì)胞儀檢測(cè)其細(xì)胞凋亡率更高。
　　結(jié)論：⑴自制PLGA