紫杉醇聯(lián)合DC疫苗對小鼠宮頸癌移植瘤影響的實驗研究.pdf

1、目的:采用紫杉醇和DC疫苗聯(lián)合作用于小鼠宮頸癌移植瘤，觀察小鼠腫瘤組織微環(huán)境里面的IL-6這一免疫抑制因子與腫瘤微環(huán)境的細胞因子VEGF發(fā)生的變化，對應用紫杉醇化療藥物后能否增強DC疫苗抗腫瘤效應進行了研究和探討。
　　 方法:
　　 1、建立荷瘤小鼠模型:取宮頸癌U14細胞，在其處于對數(shù)生長期時，通過計數(shù)板計數(shù)，將濃度調(diào)整至1×106個/0.2ml，將0.2毫升細胞接種到C57BL/6小鼠身體的背部或者腹部皮下，完成接

2、種以后的第七天展開實驗。
　　 2、制作DC疫苗:取宮頸癌U14細胞，通過照射γ射線將它們滅活，而后予以反復的凍融，從而獲得腫瘤細胞抗原。頸椎脫位法處死未荷瘤小鼠，無菌環(huán)境下提取小鼠身上股骨，獲得骨髓細胞，在rmIL-4以及rmGM-CSF誘導下進行培養(yǎng)，這樣就能夠獲得小鼠骨髓來源的樹突狀細胞，再將樹突狀細胞與腫瘤抗原共同培養(yǎng)，獲得DC疫苗，流式細胞儀鑒定DC表型。
　　 3、實驗描述:對荷瘤小鼠予以隨機分組，一共劃分成

3、4組，一組由10只組成:對照組有10只，將0.2ml的生理鹽水腹腔內(nèi)注射，每天注射一次，每只要注射0.2ml，持續(xù)14天;DC疫苗組10只，將DC疫苗于荷瘤小鼠的腫瘤局部注射一次，一周后重復注射一次;紫杉醇組10只，每只腹腔內(nèi)注射紫杉醇0.2ml，持續(xù)注射14天，每天注射一次;DC疫苗和紫杉醇聯(lián)合組10只，將紫杉醇0.2 ml于荷瘤小鼠腹腔注射，一日一次，連用3天，將DC疫苗于腫瘤局部注射一次，一周后重復。稱量瘤重，計算抑瘤率。

4、　　 4、免疫組化SP法:用麥克奧迪醫(yī)學圖像分析軟件對組化結(jié)果行定量分析，用平均光密度值(OD值)檢測小鼠瘤組織中VEGF、IL-6的表達情況。
　　 5、分析相關(guān)的數(shù)據(jù):采用多樣本均數(shù)比較的方差分析及兩兩比較的S-N-K檢驗，數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件完成，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論:
　　 1、鑒定DC:在倒置顯微鏡下觀察，于培養(yǎng)的第七天發(fā)現(xiàn)細胞出現(xiàn)樹突狀突起，大部分呈懸浮狀生

5、長，通過流式細胞儀作出鑒定，CD11c+CD86+DCs純度為89％，說明為典型成熟的DCs。
　　 2、每組小鼠具體的生長狀態(tài):各組小鼠于接種U14瘤細胞后1～10天，其生長狀態(tài)均良好，第15天后，對照組體重慢慢下降，活動、進食逐漸減少;紫杉醇組，用藥一周后，進食減少;用藥二周后，出現(xiàn)精神萎靡，而且活動緩慢。聯(lián)合組與DC疫苗組:精神狀態(tài)較好，體重無明顯下降趨勢。
　　 3、紫杉醇與DC疫苗對小鼠移植瘤的影響:在完成接種

6、瘤細胞以后的一到十天里，各組小鼠移植瘤生長大致相同;在十一到十五天，對照組生長最快;聯(lián)合組生長最慢;在十六到二十四天，對照組的生長速度明顯快于其他三組，而無論是紫杉醇組，還是聯(lián)合組，移植瘤都呈現(xiàn)縮小的趨勢。從第十八天起，DC疫苗組呈現(xiàn)縮小的趨勢，而縮小的速度最快的、表現(xiàn)的最明顯的就是聯(lián)合組。經(jīng)過稱重，聯(lián)合組、紫杉醇組、對照組以及DC疫苗組對應的重量依次是（1.728±0.005）克，（1.969±0.006）克，（3.159±0.005

7、）克以及(2.794±0.006)克，和對照組進行比較，用藥組的具體重量都要低一些，P低于0.05;各用藥組組間兩兩比較瘤重差異均有統(tǒng)計學意義，也就是說P低于0.05;依據(jù)具體的計算公式，對于聯(lián)合組和DC疫苗組以及紫衫醇組對應的抑瘤率進行計算，對應的結(jié)果分別是45.29％，11.55％以及37.67％，可以看出，在抑瘤率上，最高的是聯(lián)合組，最低的是DC疫苗組，三組組間兩兩比較抑瘤率差異均有統(tǒng)計學意義，也就是說P低于0.05。
　　

8、 4、免疫組化結(jié)果:對照組、DC疫苗組、紫杉醇組、聯(lián)合組中VEGF的OD值分別為(0.468±0.003)、(0.466±0.003)、(0.141±0.004)、（0.138±0.003）;IL-6的OD值分別為(0.472±0.006)、(0.473±0.004)、(0.139±0.004)、(0.135±0.005):紫杉醇組和聯(lián)合組VEGF、IL-6的表達量分別與對照組、DC疫苗組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;而紫

9、杉醇組與聯(lián)合組相比、DC疫苗組與對照組相比，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、通過本實驗觀察到，將U14細胞培養(yǎng)數(shù)量達1×106及以上時，注射至C57BL/6小鼠可生成腫瘤，少于此量時很難或不形成腫瘤。
　　 2、紫杉醇作用于荷瘤小鼠，可以下調(diào)腫瘤微環(huán)境中的細胞因子VEGF和免疫抑制因子IL-6的表達，減輕腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制。
　　 3、先用紫杉醇作用于荷瘤小鼠，再于腫瘤局