超聲破壞載紫杉醇微泡對宮頸癌HeLa細(xì)胞株作用的研究.pdf

1、第一部分、紫杉醇對宮頸癌HeLa細(xì)胞抑制濃度及超聲破壞微泡的輻照參數(shù)選擇。 目的：探索紫杉醇對宮頸癌HeLa細(xì)胞株的適宜抑制濃度及超聲破壞微泡的適宜輻照參數(shù)。 方法：體外培養(yǎng)宮頸癌細(xì)胞，采用MTT比色法檢測不同劑量紫杉醇對宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖抑制作用和不同輻照時間超聲破壞空白微泡對HeLa細(xì)胞的急性毒作用，并以此確定適宜的紫杉醇劑量以及超聲輻照參數(shù)。 結(jié)果： 1.當(dāng)紫杉醇濃度為10-9、10-8、10

2、-7、10-3、10-5、10-4mol/L時，細(xì)胞在72h的增殖抑制率分別為(32.37±1.12)％、(42.97±2.18)％、(51.45±0.86)％、(62.48±0.95)％、(69.81±0.57)％、(76.06±2.4)％。當(dāng)紫杉醇濃度為10-9mol/L時，24h、48h、72h的增殖抑制率分別為(11.52±1.08)％、(24.6±0.35)％、(32.37±1.12)％。其增殖抑制作用有明顯的時間效應(yīng)和劑量效

3、應(yīng)關(guān)系。當(dāng)聲強為0.5W/cm2，輻照時間20S即可破壞微泡。 2.聲強固定在0.5W/cm2,時間10S、20S、30S，破壞微泡后即檢測細(xì)胞的存活率為(92.84±0.66)％、(85.69±2.67)％、(76.61±2.74)％。 結(jié)論：紫杉醇對宮頸癌HeLa細(xì)胞有增殖抑制作用。適宜參數(shù)下超聲破壞空白微泡對宮頸癌HeLa細(xì)胞的急性毒作用影響不大。適宜的超聲輻照參數(shù)為0.5W/cm2、20S，紫杉醇劑量為1O-7m

4、ol/L。 第二部分、超聲破壞載紫杉醇微泡對宮頸癌HeLa細(xì)胞株增殖、凋亡的影響研究。 目的：觀察超聲破壞載紫杉醇微泡對宮頸癌HeLa細(xì)胞株的增殖、凋亡以及細(xì)胞周期改變的影響。 方法： 1.體外培養(yǎng)宮頸癌細(xì)胞，將細(xì)胞分為5組，即紫杉醇組、紫杉醇聯(lián)合超聲輻照組、載紫杉醇微泡聯(lián)合超聲輻照組、載紫杉醇微泡組及空白對照組，MTT比色法檢測不同觀察時間點各組細(xì)胞的增殖抑制情況。 2.透射電鏡觀察各組細(xì)胞的超

5、微結(jié)構(gòu)變化。 3.FCM分析各組細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)及細(xì)胞周期的改變。 結(jié)果： 1.超聲破壞載紫杉醇微泡組、紫杉醇組及超聲聯(lián)合紫杉醇組均能明顯抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖，超聲破壞紫杉醇微泡組的作用更為明顯，三組之間比較，差異具有顯著意義(P＜0.01)，而相同濃度的載紫杉醇微泡組對HeLa細(xì)胞的增殖影響不顯著。 2.透射電鏡觀察到超聲聯(lián)合紫杉醇微泡組可見凋亡小體，超聲聯(lián)合紫杉醇可見凋亡細(xì)胞，紫杉醇組觀察到早期凋

6、亡細(xì)胞，空白組和單純微泡組細(xì)胞形態(tài)較為正常。 3.FCM定量分析結(jié)果表明各組細(xì)胞的凋亡率分別為：空白組(2.18±0.11)％、單純紫杉醇微泡組(5.21±0.34)％、單純紫杉醇組(11.77±0.54)％、紫杉醇聯(lián)合超聲組(15.69±0.43)％、紫杉醇微泡聯(lián)合超聲組(27.5±0.59)％。超聲破壞載紫杉醇微泡組、紫杉醇組及紫杉醇聯(lián)合超聲組均表現(xiàn)為G2/M阻滯，進入S期和G0/G1期細(xì)胞減少。各組細(xì)胞的阻滯率分別為：空白