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文檔簡介
1、目的:
宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。細(xì)胞的失控性生長是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征之一,手術(shù)和放化療的自身缺陷嚴(yán)重限制了宮頸癌患者的療效。因此,探索中藥等在宮頸癌治療中應(yīng)用的可行性具有重要的臨床意義。黃芪是常用的補(bǔ)氣中藥,黃芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)是黃芪的主要活性成分之一。研究發(fā)現(xiàn),APS可抑制白血病、胃癌、乳腺癌等惡性腫瘤細(xì)胞的生長。但尚未見APS對宮頸癌Hela細(xì)胞生長的
2、抑制作用及機(jī)制的報道。本研究旨在探討APS對宮頸癌Hela細(xì)胞生長的抑制作用及相關(guān)機(jī)制,為APS在宮頸癌治療中的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
方法:
1.提取APS并定量。
2.通過細(xì)胞生長曲線觀察APS對宮頸癌Hela細(xì)胞的生長速度和倍增時間的影響。
3.通過平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)觀察APS對宮頸癌Hela細(xì)胞的克隆形成能力和細(xì)胞周期分布的影響。
4.通過Western blottin
3、g方法觀察APS處理前后宮頸癌Hela細(xì)胞中細(xì)胞周期蛋白A(cyclin A)、cyclin B、cyclin E和p21等細(xì)胞生長相關(guān)基因表達(dá)的變化。
結(jié)果:
1.制備的APS水溶液的濃度為53.623mg/mL。
2.細(xì)胞生長曲線結(jié)果顯示:100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的APS處理的宮頸癌Hela細(xì)胞生長速度均明顯慢于未用APS處理的宮頸癌Hela細(xì)胞(P<0.01),不同濃度AP
4、S處理的宮頸癌Hela細(xì)胞的倍增時間顯著長于未用APS處理的宮頸癌Hela細(xì)胞(P<0.01)。
綜合考慮100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的APS對宮頸癌Hela細(xì)胞的生長均具有抑制作用和細(xì)胞狀態(tài)的變化,后續(xù)實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)組為200μg/mL的APS誘導(dǎo)48h的宮頸癌Hela細(xì)胞,對照組為不加藥的宮頸癌Hela細(xì)胞。
3.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組宮頸癌Hela細(xì)胞的克隆形成均數(shù)顯著低于對照組
5、宮頸癌Hela細(xì)胞(P<0.01),且克隆體積較小。
4.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:與對照組宮頸癌Hela細(xì)胞相比,實(shí)驗(yàn)組宮頸癌Hela細(xì)胞的細(xì)胞周期出現(xiàn)G1期阻滯(P<0.01),同時,S期(P<0.01)和G2/M期(P<0.05)細(xì)胞減少。
5.Western blotting結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組宮頸癌Hela細(xì)胞中cyclin B和cyclin E的表達(dá)顯著低于對照組宮頸癌Hela細(xì)胞(P<0.01),p21的表達(dá)顯著
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