卵泡液中AMH和顆粒細胞端粒長度與卵母細胞成熟度及IVF-ET結局關系的探究.pdf

1、背景:世界第一例試管嬰兒于1978年誕生，自此人類輔助生殖技術(ART)發(fā)展迅速，給眾多不孕癥夫婦帶來希望。但是，體外受精-胚胎移植(IVF-ET)技術的臨床療效離人們預期的抱嬰率還有很大差距。
　　卵子和胚胎質(zhì)量是決定ART成功的主要因素，如何準確高效地評估卵子和胚胎質(zhì)量一直是胚胎學家研究的焦點，選擇高質(zhì)量胚胎移植是臨床生殖醫(yī)師面臨的一項難題。目前，臨床上仍通過形態(tài)學觀察來評估卵子和胚胎質(zhì)量，但此方法受到實驗室觀察人員的主觀因素

2、影響，不同觀察人員對卵子和胚胎質(zhì)量的分型可能會存在一些差異；為了減少因主觀因素所導致的誤差，臨床上通過移植2-3個優(yōu)質(zhì)胚胎，這導致多胎妊娠的風險及各種不良并發(fā)癥的發(fā)生率大大增加，給患者及家庭帶來身心和經(jīng)濟的雙重負擔。卵泡液可為卵母細胞生長、成熟提供各種激素及細胞因子；卵泡中顆粒細胞與卵母細胞之間關系密切，細胞間存在縫隙連接，依靠連接蛋白細胞間相互交換信息、相互促進、同步發(fā)育。顆粒細胞還以內(nèi)分泌的方式對卵母細胞的成熟起作用，影響受精甚至胚

3、胎的發(fā)育潛能。在輔助生殖治療進程中，集中研究顆粒細胞及相關的卵泡液，將有著廣闊的前景，有望對卵子和胚胎選擇提供一種高效無創(chuàng)的檢測方式，從而推動ART的快速發(fā)展。
　　以往的研究顯示，卵泡中顆粒細胞的功能狀態(tài)和細胞因子的水平與卵子的成熟、受精及胚胎質(zhì)量密切相關。卵母細胞發(fā)育歷程中，卵泡液中細胞因子的類別不斷變化，伴隨著卵巢內(nèi)體細胞增殖。抗苗勒管激素（AMH）由顆粒細胞分泌，以自分泌及旁分泌機制調(diào)節(jié)顆粒細胞和卵泡功能；端粒(telom

4、ere)和端粒酶調(diào)控著細胞增殖與凋亡的平衡，決定細胞增殖能力的關鍵在于端粒長度的維持。然而目前鮮有關于人卵泡液中 AMH和顆粒細胞端粒長度與卵母細胞成熟度及IVF-ET助孕結局關系的研究，研究AMH與顆粒細胞端粒間的關系，探尋延緩端?？s短機制，進而促進卵泡發(fā)育。
　　目的:本研究通過酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）及實時熒光定量 PCR（qRT-PCR）檢測IVF-ET患者卵泡液內(nèi)AMH水平及顆粒細胞端粒長度，分析二者與體外受精-胚胎

5、移植中卵母細胞成熟度和妊娠結局之間的關系，探討其對卵母細胞質(zhì)量評估及優(yōu)質(zhì)胚胎選擇的意義。
　　方法:收集2014年10月-2015年3月于鄭州大學第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心因輸卵管因素行IVF-ET治療的不孕癥患者卵泡液（92例），其中81例獲得卵丘顆粒細胞。采用黃體中期短效長方案促排卵，經(jīng)陰道超聲引導下穿刺取卵。穿刺時吸凈每個卵泡內(nèi)全部卵泡液，每個的卵泡液分別放置，依據(jù)卵丘-卵母細胞復合物形態(tài)評分，將每位患者相同成熟度卵母細胞對應

6、的卵泡液集中在一起；采取人工剝離每個卵母細胞周圍的部分卵丘顆粒細胞(CCs)，分別收集，將每位患者成熟度一致的卵母細胞對應的卵丘顆粒細胞團混合。根據(jù)年齡（低齡：<35歲，高齡：≥35歲）及卵母細胞成熟度，將對應的卵泡液和CCs分為4組：低齡成熟、未成熟卵母細胞組，高齡成熟、未成熟卵母細胞組。用ELISA法測定各年齡組不同成熟度卵母細胞其AMH水平，用qRT-PCR檢測兩年齡組不同成熟度卵母細胞周圍的CCs端粒情況。追蹤IVF-ET妊娠結

7、局，并比較兩年齡組妊娠者、未妊娠者的AMH的水平及CCs端粒的情況。
　　結果:
　　1.低齡、高齡的未成熟卵母細胞組卵泡液內(nèi)AMH水平都高于低、高齡的成熟組，低齡組中未成熟和成熟卵母細胞其卵泡液中 AMH比較差異無統(tǒng)計學意義、高齡組內(nèi)差異具有統(tǒng)計學意義；在兩不同年齡組中，未妊娠者和妊娠者卵泡液AMH水平無統(tǒng)計學差異。
　　2.卵泡液中AMH水平和年齡呈負相關。
　　3.低齡、高齡的未成熟卵母細胞組內(nèi)顆粒細胞端粒

8、長度均較低齡、高齡的成熟組的短，差異具有統(tǒng)計學意義。低齡組內(nèi)未妊娠者顆粒細胞端粒長度較妊娠者短，差異無統(tǒng)計學意義；高齡組內(nèi)未妊娠者顆粒細胞端粒長度較妊娠者短，差異有統(tǒng)計學意義。
　　4.顆粒細胞端粒長度與年齡呈負相關，卵泡液中AMH和顆粒細胞端粒長度呈負相關。
　　結論:
　　1.AMH在成熟、未成熟卵泡中均有表達，且與年齡呈負相關，AMH在一定程度與卵母細胞成熟度相關。
　　2.顆粒細胞端粒長度與年齡呈負相關，