ECAT1和顆粒細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育作用的研究.pdf

1、哺乳動(dòng)物卵子發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，它是從原始生殖細(xì)胞形成開(kāi)始到產(chǎn)生成熟卵子為止。世界上15％-20％的人不能生育，其中約一半是女性，而卵母細(xì)胞發(fā)育異常是其最重要的致病因素，因此，避免卵母細(xì)胞發(fā)生損傷以及提高卵母細(xì)胞質(zhì)量對(duì)于改善人類生殖具有重要意義。為探究體ECAT1和顆粒細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育的影響，為人類輔助生殖提供理論支持，我們做了以下工作:
　　1.卵母細(xì)胞中蘊(yùn)含大量的母源基因，它們?cè)诼涯讣?xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育中發(fā)揮著重要作用。

2、到目前為止，許多母源基因的功能只在小鼠等低等動(dòng)物中被報(bào)道，而在人類卵母細(xì)胞中的作用還未有研究。ECAT1是母源效應(yīng)復(fù)合體的一個(gè)組分，其在小鼠卵母細(xì)胞中的功能已被闡明，但在人類卵母細(xì)胞成熟、受精以及早期胚胎發(fā)育中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。我們對(duì)ECAT1在人各組織中的表達(dá)進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)其在卵巢中表達(dá)較高，免疫熒光染色的結(jié)果顯示ECAT1定位在人卵母細(xì)胞和早期胚胎細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。利用RNA干擾技術(shù)，降低人GV卵母細(xì)胞中ECAT1的表達(dá)，導(dǎo)致了卵母

3、細(xì)胞成熟障礙。對(duì)ECAT1 RNA干擾后成熟的卵母細(xì)胞進(jìn)行卵胞漿內(nèi)單精子注射，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其受精、卵裂以及胚胎發(fā)育都出現(xiàn)了異常，這可能是由于ECAT1 RNA干擾后，減數(shù)第二次分裂中期紡錘體組裝發(fā)生了異常。因此，本研究揭示了ECAT1在人卵母細(xì)胞和胚胎發(fā)育中的作用，為由卵母細(xì)胞或胚胎發(fā)育障礙引起的不育癥的臨床診斷提供了潛在的分子標(biāo)志。
　　2.由于輔助生殖和卵母細(xì)胞發(fā)育研究的需要，提高體外成熟(IVM)卵母細(xì)胞的質(zhì)量是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。

4、IVM卵母細(xì)胞與體內(nèi)成熟(IVO)卵母細(xì)胞存在質(zhì)量上的差異，顆粒細(xì)胞與卵母細(xì)胞共培養(yǎng)可以提高卵母細(xì)胞質(zhì)量，但其中的機(jī)制尚不明確。我們分別對(duì)IVO卵母細(xì)胞、單獨(dú)培養(yǎng)的卵母細(xì)胞及與顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)的卵母細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。研究發(fā)現(xiàn)，與顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)可以減少IVM對(duì)卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組造成的差異;對(duì)差異基因的KEGG分析發(fā)現(xiàn)，IVM會(huì)導(dǎo)致溶酶體、甘油磷脂代謝、三羧酸循環(huán)、核糖體組裝、蛋白質(zhì)折疊和自噬等異常，而與顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)可以減少這些異常發(fā)生