染料木黃酮對(duì)缺血缺氧PC12細(xì)胞生存狀態(tài)及相關(guān)生理生化指標(biāo)的影響.pdf

1、腦組織對(duì)缺血十分敏感，短暫的缺血可以導(dǎo)致腦組織復(fù)雜的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致神經(jīng)元的死亡，造成神經(jīng)功能廣泛受損。因此如何防治缺血性腦卒中所致神經(jīng)元死亡一直是醫(yī)學(xué)上的難題。染料木黃酮（Genistein）與哺乳動(dòng)物內(nèi)源雌激素結(jié)構(gòu)相似，在抑制認(rèn)知功能障礙等神經(jīng)退行性疾病方面已有相關(guān)研究。
　　本文主要研究染料木黃酮對(duì)缺血缺氧PC12細(xì)胞生存狀態(tài)和一些生理生化指標(biāo)的影響。實(shí)驗(yàn)檢測指標(biāo)及方法：以PC12細(xì)胞作為神經(jīng)細(xì)胞的模型細(xì)胞，使用化學(xué)缺氧法

2、建立氧糖剝奪模型（OGD模型），設(shè)置對(duì)照組、OGD模型組、染料木黃酮處理OGD組，采用顯微觀察法觀察不同組別處理3h、6h和24hPC12細(xì)胞的生存狀態(tài)，MTT法測定不同組別處理3h、6h和24hPC12細(xì)胞的存活率，TUNEL法測定不同組別處理3h和6hPC12細(xì)胞的凋亡率，高效液相色譜法測定不同組別處理3h、6h和24hPC12細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸的含量，細(xì)胞免疫熒光法測定不同組別處理3h、6h和24hPC12細(xì)胞膜表面谷氨酸AM

3、PA受體GluR2亞基的含量，全細(xì)胞膜片鉗法測定不同組別處理1h和3hPC12全細(xì)胞鉀離子通道電流。研究表明：⑴生長狀態(tài)與存活率的變化：與對(duì)照組比較，OGD處理3h、6h、24h的模型組細(xì)胞的生長狀態(tài)變差，細(xì)胞腫脹變圓，細(xì)胞膜不完整，細(xì)胞間聯(lián)系不再緊密，細(xì)胞的存活率降低，差異極顯著（p<0.01），且具有時(shí)間依賴性。染料木黃酮處理OGD組與OGD組比較，細(xì)胞狀態(tài)的變化趨勢不相同：3h時(shí)，細(xì)胞膜較完整，多數(shù)細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞狀態(tài)較好，細(xì)胞存

4、活率顯著提高（p<0.05），但與對(duì)照組比仍有極其顯著的降低（p<0.01）；6h時(shí)，與OGD組比較，細(xì)胞狀態(tài)無明顯變化，細(xì)胞存活率有升高趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異（p>0.05）；24h時(shí)，細(xì)胞狀態(tài)反而較OGD組細(xì)胞差，細(xì)胞存活率降低，差異極顯著。⑵細(xì)胞凋亡率的變化：與對(duì)照組比較，OGD處理3h、6h的模型組細(xì)胞的凋亡率有極其顯著的增加（p<0.01）。染料木黃酮處理OGD組與OGD組比較，3h時(shí)，細(xì)胞凋亡率有顯著性的降低（p<0

5、.05），但與對(duì)照組相比仍極顯著性升高（p<0.01）；6h時(shí)，與OGD組比較，細(xì)胞凋亡率有極其顯著性降低（p<0.01），但與對(duì)照組相比仍極顯著性升高。⑶天冬氨酸的變化：OGD組與對(duì)照組比較，3h、6h和24h時(shí)，細(xì)胞內(nèi)天冬氨酸含量均有升高，其中3h時(shí)，差異極顯著（p<0.01），而6h和24h時(shí)，無顯著性差異（p>0.05）。染料木黃酮處理OGD組與OGD組比較：3h時(shí)，天冬氨酸含量降低但無顯著性差異，但與對(duì)照組相比仍有極其顯著的升

6、高（p<0.01）；6h、24h時(shí)，天冬氨酸含量仍升高，無法逆轉(zhuǎn)OGD處理對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)天冬氨酸含量的影響。谷氨酸的變化：OGD組與對(duì)照組比較，3h時(shí)，細(xì)胞內(nèi)谷氨酸含量無顯著性變化；而6h和24h時(shí)，谷氨酸含量降低，差異分別為顯著（p<0.05）和極顯著（p<0.01）。染料木黃酮處理OGD組與OGD組和對(duì)照組比較：所有時(shí)段均無顯著性差異。甘氨酸的變化：OGD組與對(duì)照組比較，3h時(shí)，有所降低但無顯著性差異；6h時(shí)，顯著性降低（p<0.

7、05）；24h時(shí)，極顯著性降低（p<0.01）。染料木黃酮處理OGD組與OGD組比較，3h時(shí)，顯著性升高（p<0.05），與對(duì)照組相比也有顯著性升高（p<0.05）；6h時(shí)，有顯著性升高（p<0.05），與對(duì)照組相比，則無顯著性差異；24h時(shí)，甘氨酸則無顯著性差異。γ-氨基丁酸的變化：OGD組與對(duì)照組比較，3h時(shí)，含量降低但無顯著性差異；6h和24h時(shí)，則有極其顯著性降低（p<0.01）。染料木黃酮處理OGD組與OGD組比較，3h、6h

8、和24h時(shí)，均無顯著性差異；而與對(duì)照組相比，3h和6h有顯著性降低（p<0.05），24h有極其顯著性降低。⑷細(xì)胞GluR2亞基含量的變化：與對(duì)照組比較，OGD處理3h、6h、24h的模型組均有極顯著降低（p<0.01）。染料木黃酮處理OGD組與OGD組比較，3h、6h、24h時(shí)有極其顯著性升高（p<0.01），但與對(duì)照組相比，則極顯著降低。⑸細(xì)胞鉀離子通道電流特性的變化：與對(duì)照組比較，OGD處理1h、3h的模型組細(xì)胞的全細(xì)胞鉀通道電流

9、的峰值降低，外向整流性不明顯，1h時(shí)，鉀離子通道激活曲線向超極化方向移動(dòng)，斜率因子極其顯著性升高（p<0.01），鉀通道激活速度慢；3h時(shí)，激活曲線向去極化方向移動(dòng)，斜率因子顯著性升高（p<0.05），鉀離子通道激活速度變慢。染料木黃酮處理OGD組與OGD組比較，1h、3h時(shí)的全細(xì)胞鉀通道電流的峰值升高，外向整流性明顯，接近對(duì)照組的水平；1h時(shí)，鉀離子通道激活曲線向去極化方向移動(dòng)，斜率因子降低但無顯著性差異（p>0.05），接近對(duì)照組水