OTUD7B對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移、凋亡及血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：乳腺癌對(duì)世界女性造成的身心傷害早已不容樂觀。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是由多基因、多通路、多反應(yīng)相互作用的結(jié)果，其發(fā)病率和病死率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。腫瘤的增殖速率、發(fā)生轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移部位不同直接影響著乳腺癌患者的生存期。近年來乳腺癌患者的發(fā)病年齡趨向于年輕化，發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移的機(jī)率大大增加，導(dǎo)致許多患者就診時(shí)已經(jīng)失去了手術(shù)時(shí)機(jī)，直接影響著患者總生存期。所以抑制腫瘤的生長、阻斷腫瘤的轉(zhuǎn)移，對(duì)提高患者的生存率、改善生活質(zhì)量發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。然而

2、腫瘤血管生成是引發(fā)惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的根本源頭，所以抑制乳腺癌細(xì)胞的血管生成對(duì)治療乳腺癌具有極其重大的意義。其中核因子-KappaB（NF-κB）可調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達(dá)，而去泛素化酶對(duì)于NF-κB的調(diào)節(jié)至關(guān)重要。有研究發(fā)現(xiàn)NF-κB不僅能夠在胃癌、甲狀腺癌、乳腺癌中促進(jìn)VEGF的表達(dá)，還能夠促進(jìn)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。去泛素化酶OTUD7B能夠阻止NF-

3、κB激活，而NF-κB能夠調(diào)節(jié)癌細(xì)胞遷移、侵襲、血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)等。所以明確去泛素化酶OTUD7B與乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移、凋亡及VEGF表達(dá)之間的關(guān)系，可能為治療乳腺癌提供新的方法。
　　方法：構(gòu)建慢病毒小干擾RNA沉默載體（LV3-si-hOTUD7B）及對(duì)照載體（LV3-NC），構(gòu)建帶有綠色熒光蛋白標(biāo)簽的人OTUD7B表達(dá)質(zhì)粒（pEGFP-hOTUD7B）及對(duì)照質(zhì)粒（pEGFP-CI）。用包含LV3-si-hOTUD7B

4、、LV3-NC、pEGFP-hOTUD7B、pEGFP-CI慢病毒液分別感染MCF-7細(xì)胞。MTS法檢測(cè)OTUD7B對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)OTUD7B對(duì)MCF-7細(xì)胞遷移能力的影響；流式細(xì)胞術(shù)PI染色法檢測(cè)OTUD7B對(duì)MCF-7細(xì)胞周期的影響；蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測(cè)OTUD7B對(duì)MCF-7細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)NF-κBP65和細(xì)胞核NF-κBP65的表達(dá)水平的調(diào)節(jié)；RT-PCR檢測(cè)OTUD7B對(duì)VEG

5、F mRNA的相對(duì)表達(dá)水平的影響；ELISA檢測(cè)OTUD7B對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞分泌VEGF的調(diào)節(jié)。應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-x±s）表示，均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析（One-way ANOVA），以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:通過MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖顯示，轉(zhuǎn)染pEGFP-hOTUD7B后，MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖受到抑制，轉(zhuǎn)染LV3-si-hOTUD7B后，MCF-

6、7乳腺癌細(xì)胞增殖得到促進(jìn)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)染pEGFP-hOTUD7B后，MCF-7乳腺癌細(xì)胞遷移受到抑制，轉(zhuǎn)染LV3-si-hOTUD7B后，MCF-7乳腺癌細(xì)胞遷移能力升高。流式細(xì)胞術(shù)PI染色檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果提示pEGFP-hOTUD7B可調(diào)節(jié)MCF-7細(xì)胞周期阻滯在G1期。Western blot結(jié)果分析顯示，與陰性對(duì)照組及正常對(duì)照組相比，pEGFP-hOTUD7B能夠下調(diào)MCF-7乳腺癌細(xì)胞核蛋白NF-κBP65的表達(dá)水平，

7、而細(xì)胞質(zhì)內(nèi)NF-κBP65卻無明顯差異。RT-PCR結(jié)果提示，在mRNA水平，pEGFP-hOTUD7B抑制了VEGF的表達(dá)。ELISA法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞條件培養(yǎng)基中的VEGF含量結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組及正常對(duì)照組相比，pEGFP-hOTUD7B組條件培養(yǎng)基中VEGF含量低。
　　結(jié)論：OTUD7B能夠抑制MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移能力，可調(diào)節(jié)MCF-7乳腺癌細(xì)胞阻滯于G1期，同時(shí)還可抑制MCF-7乳腺癌細(xì)胞對(duì)VEGF的表達(dá)