雌激素對(duì)成骨細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：骨質(zhì)疏松癥(OP)是一種以骨量減少、骨微結(jié)構(gòu)改變?yōu)樘卣鞯拇x骨疾病。在骨代謝中，雌激素和細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有重要作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelialgrowth factor，VEGF)，既是血管生成因子，又是骨生長(zhǎng)因子。它通過(guò)對(duì)成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞的增殖分化和活性的調(diào)節(jié)起作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞，然后以不同濃度雌激素干預(yù)24h后，應(yīng)用免疫組織化學(xué)及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法觀察成骨細(xì)胞

2、VEGF表達(dá)情況，探討雌激素對(duì)成骨細(xì)胞上VEGF表達(dá)的影響。
　　 方法：選取新生48h大鼠六只，摘取顱蓋骨，經(jīng)酶解消化得到成骨細(xì)胞，并進(jìn)行體外培養(yǎng)。通過(guò)堿性磷酸酶染色(ALP染色)和礦化結(jié)節(jié)染色完成成骨細(xì)胞的鑒定。取第4代成骨細(xì)胞，隨機(jī)分為5組，分別給予0 mol/L、10-10 mol/L，10-8 mol/L，10-6mol/L，104 mol/L17β-雌二醇干預(yù)。干預(yù)24h后，應(yīng)用免疫組織化學(xué)及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(R

3、T-PCR)方法檢測(cè)VEGF表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.細(xì)胞形態(tài)觀察、細(xì)胞鑒定：倒置相差顯微鏡下見(jiàn)細(xì)胞接種后培養(yǎng)24h貼壁，細(xì)胞呈梭形，三角形和多角形等形態(tài)；堿性磷酸酶染色后，大多數(shù)細(xì)胞膜及胞漿中可見(jiàn)黑褐色顆粒。當(dāng)細(xì)胞形成鈣化結(jié)節(jié)后，進(jìn)行茜素紅染色，可見(jiàn)紅色結(jié)節(jié)。
　　 2.經(jīng)RT-PCR及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)表明，VEGF在原代成骨細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)；半定量分析證實(shí)，不同17β-雌二醇劑量組間VEGF的表達(dá)