農(nóng)經(jīng)(獸藥)與蛋白質(zhì)相互作用的光譜法研究及其分析測定.pdf

1、本論文對農(nóng)藥(獸藥)小分子的定量測定分析進(jìn)行研究,應(yīng)用熒光光譜法以及與化學(xué)計(jì)量學(xué)結(jié)合、共振光散射技術(shù)等多種方法應(yīng)用于實(shí)際樣品中幾種農(nóng)藥(獸藥)殘留的分析；同時(shí)應(yīng)用熒光光譜法、紫外-可見分光光度法、圓二色譜法等現(xiàn)代分析技術(shù)對農(nóng)藥(獸藥)小分子與蛋白質(zhì)在生理pH值條件下的相互作用進(jìn)行了研究。為這些有害化合物檢測提供新方法,同時(shí)從分子水平上了解有害化合物質(zhì)在體內(nèi)的儲存、轉(zhuǎn)運(yùn)提供了理論依據(jù)。主要內(nèi)容如下:
　　 1.速滅威能與牛血清白蛋

2、白(BSA)發(fā)生相互作用產(chǎn)生熒光增強(qiáng)效應(yīng),測定了不同溫度下的結(jié)合常數(shù)；應(yīng)用熒光偏振技術(shù)分析了藥物與蛋白質(zhì)的作用情況；利用范德霍夫方程計(jì)算了反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù),確定了速滅威-BSA體系的主要作用力為氫鍵和范德華力；同步熒光光譜、三維熒光圖譜以及熒光偏振實(shí)驗(yàn)表明,速滅威的加入使BSA的二級結(jié)構(gòu)改變:
　　 在pH4.0的Britton-Robinson(B—R)緩沖溶液中,波長差Δλ=30 nm時(shí),加入一定量的β-環(huán)糊精,3種農(nóng)藥的熒

3、光強(qiáng)度均有不同程度的增加,且與農(nóng)藥的濃度呈良好的線性關(guān)系,速滅威、殘殺威和呋喃丹單組分的測量線性范圍分別為0.2-2.0、0.02-0.38和0.04-0.56μg·mL-1；檢出限分別為0.083、0.015和0.020μg·mL-1。應(yīng)用如經(jīng)典最小二乘(CLS)、主成分回歸(PCR)和偏最小二乘(PLS)等多種化學(xué)計(jì)量學(xué)校正模型對3種農(nóng)藥的混合體系合成樣品進(jìn)行光譜解析并進(jìn)行比較。建立了一種同時(shí)檢測殘殺威、速滅威和呋喃丹3種能夠產(chǎn)生較

4、強(qiáng)的內(nèi)源熒光但光譜嚴(yán)重重疊的氨基甲酸酯類農(nóng)藥的新方法。結(jié)果表明,PLS有較好的預(yù)報(bào)能力對3種農(nóng)藥含量的測定,采用該模型對一些實(shí)際食品樣品進(jìn)行分析,結(jié)果滿意。
　　 2.采用熒光法研究抗蚜威與溶菌酶(LYS)的相互作用,得出抗蚜威以動態(tài)猝滅方式猝滅溶菌酶的內(nèi)源熒光；非輻射能量轉(zhuǎn)移也是導(dǎo)致抗蚜威對溶菌酶內(nèi)源熒光的猝滅的原因之一；由熱力學(xué)參數(shù)推斷出疏水作用力是抗蚜威與LYS之間的主要作用力;同步及三維熒光光譜顯示抗蚜威對LYS的構(gòu)象產(chǎn)

5、生影響；
　　 研究發(fā)現(xiàn)抗蚜威在pH7.0的B-R緩沖介質(zhì)中,十六烷基三甲基溴化銨(CTMAB)于λex／λem=252／397 nm處能敏化抗蚜威的熒光,且熒光強(qiáng)度與抗蚜威的濃度有良好的線性關(guān)系,抗蚜威濃度線性范圍為0.006—0.14μg·mL-1,檢出限為5.7 ng·mL-1。據(jù)此建立了一種靈敏、簡便的熒光光度法測定食品中抗蚜威殘留量。將該法用于測定實(shí)際食品樣品中的抗蚜威殘留量,結(jié)果滿意。
　　 3.采用熒光、紫

6、外可見光譜法以及圓二色譜等方法研究了在生理pH條件下呋喃唑酮與BSA的結(jié)合作用。熒光和紫外光譜的結(jié)果表明呋喃唑酮對BSA的熒光的猝滅作用屬于靜態(tài)猝滅。求得了不同溫度下呋喃唑酮與BSA作用的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、結(jié)合常數(shù)及反應(yīng)熱力學(xué)參數(shù),并推測了它們之間主要的相互作用力為氫鍵和范德華力。根據(jù)F(o)rster非輻射能量轉(zhuǎn)移理論,求出呋喃唑酮在BSA的結(jié)合位置與色氨酸殘基間的距離為3.51nm。同步熒光光譜法、三維等高線光譜法以及圓二色譜方法顯示呋喃

7、唑酮的加入對BSA的構(gòu)象產(chǎn)生影響。呋喃唑酮與結(jié)合位點(diǎn)探針華法林、布洛芬和洋地黃毒苷(siteⅠ、siteⅡ和siteⅢ)的競爭實(shí)驗(yàn)表明呋喃唑酮結(jié)合在BSA疏水空腔的siteⅠ位點(diǎn)上:
　　 在pH=7.00的B-R緩沖溶液介質(zhì)中,吖啶橙本身發(fā)較強(qiáng)熒光,但是呋喃唑酮的加入猝滅了吖啶橙(AO)的熒光,且猝滅的熒光強(qiáng)度△F與呋喃唑酮的濃度在0.06-0.60μg·mL-1范圍內(nèi)存在線性關(guān)系,其檢出限(S／N=3)為0.0521μg·m

8、L-1。該方法用于雞蛋、基圍蝦、豬腎中的測定,測得回收率在83.9-125.0％之間,RSD在0.7-4.8％之間。
　　 4.采用熒光光譜等方法對甲氰菊酯-人血清白蛋白(HSA)之間的各種作用信息進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:甲氰菊酯以動態(tài)猝滅的方式猝滅HSA的內(nèi)源熒光；根據(jù)結(jié)合反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)推斷出甲氰菊酯與HSA之間的作用過程是一個熵增加、Gibbs自由能降低的自發(fā)分子作用過程,疏水作用力是甲氰菊酯與HSA之間的主要作用力；通過同

9、步熒光、等高線圖譜以及圓二色譜技術(shù)證明甲氰菊酯與HSA的相互作用會對HSA的構(gòu)象產(chǎn)生影響；
　　 研究發(fā)現(xiàn)甲氰菊酯在pH1.7的HCl—NaAC緩沖溶液中能與變色酸2R反應(yīng),于421 nm波長處產(chǎn)生穩(wěn)定且稍有增強(qiáng)的共振散射信號,且與甲氰菊酯的質(zhì)量濃度在0.03-0.66μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,其檢出限(S／N=3)=0.0249μg·mL-1。據(jù)此建立了一種用共振散射技術(shù)測定農(nóng)藥甲氰菊酯殘留量的新方法。該方法用于水