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文檔簡介
1、研究背景:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者隨病情進展可出現(xiàn)不同程度的貧血癥狀,貧血率可高達70%以上,慢性病性貧血最常見。SLE患者因伴有自由基代謝障礙,活性氧類聚集從而形成機體過氧化狀態(tài)。研究證實紅細胞在氧化壓力、能量供給不足、感染等因素作用下凋亡率增加。探討紅細胞凋亡損傷可能是對研究SLE患者貧血病因的科學補充。
目的:研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)貧血患者紅細胞凋亡損傷,并探討其可能的發(fā)生機制。
方法:本研究分別以S
2、LE患者和健康獻血員作為實驗組和對照組,分為紅細胞實驗、血漿孵育紅細胞實驗和血漿抗氧化能力實驗三部分。紅細胞實驗為研究兩組對象紅細胞凋亡損傷。分別收集20例兩組對象的新鮮全血,測量血細胞參數(shù)。常規(guī)分離出紅細胞,制成一定濃度的紅細胞懸液。經(jīng)Annexin V-FITC熒光染色,利用流式細胞儀檢測細胞凋亡率及細胞體積大小,同時用激光共聚焦顯微鏡觀察凋亡細胞的形態(tài);經(jīng)熒光探針Fluo-3/AM和DCFH-DA標記,利用流式細胞儀檢測細胞內(nèi)鈣離
3、子濃度和胞內(nèi)活性氧類含量;熒光標記二抗-流式法檢測胞內(nèi)神經(jīng)酰胺含量。分別比較兩組各項指標差異。血漿孵育紅細胞實驗為研究 SLE患者血漿對紅細胞調(diào)亡損傷的影響,分別收集20例兩組對象新鮮全血,分離出的血漿用以孵育健康人O型紅細胞。24小時后用相同方法檢測兩組紅細胞凋亡率及體積、胞內(nèi)鈣離子濃度、神經(jīng)酰胺和活性氧類含量,比較兩組差異。另外利用酶標儀測量比較兩組血漿總抗氧化能力差異。
結(jié)果:實驗組血紅蛋白含量及血細胞比容均明顯低于正常
4、對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001);紅細胞實驗中,實驗組細胞凋亡率、胞內(nèi)鈣離子濃度顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001);實驗組胞內(nèi)活性氧類含量明顯高于對照組(P<0.01);相比健康獻血員,患者紅細胞體積縮小,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);兩組細胞胞內(nèi)神經(jīng)酰胺含量無明顯差異;激光共聚焦熒光顯微鏡下可以觀察到凋亡紅細胞膜上的FITC熒光信號。血漿孵育紅細胞實驗中,實驗組細胞凋亡率、胞內(nèi)鈣離子濃度顯著高于對照組,差
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