SLE患者Tfh細(xì)胞產(chǎn)生機(jī)制初步研究.pdf

1、目的：研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血中CXCR5+PD1+/CD4+T淋巴細(xì)胞(即濾泡輔助性T細(xì)胞，Tfh)的百分比及與健康對(duì)照相比的變化情況，分析其與SLE疾病活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)、自身抗體及臨床指標(biāo)的相關(guān)性，探討其在SLE發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：收集20例活動(dòng)期、21例非活動(dòng)期SLE患者及22例健康對(duì)照外周血，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，標(biāo)記流式抗體(CD4、PD1、CXCR5)，以鼠抗人IgG1作為P

2、D1同型對(duì)照，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CXCR5+PD1+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中抗核抗體(ANA)、抗ds-DNA的表達(dá)。以大于健康對(duì)照X+2s為界，將SLE患者分為Tfh細(xì)胞高表達(dá)組和低表達(dá)組，并根據(jù)臨床癥狀或?qū)嶒?yàn)室檢查結(jié)果比較兩組間的差異。不同組間行Mann-Whitney或Fisher’s exact檢驗(yàn)；Tfh細(xì)胞比例與SLEDAI的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析法，以p<0.05為差

3、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：SLE患者PBMC中Tfh細(xì)胞的百分比高于健康對(duì)照組(p<0.05)，其中活動(dòng)組顯著高于對(duì)照組(p<0.05)，而非活動(dòng)組與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。Tfh細(xì)胞百分比與SLEDAI、ANA呈正相關(guān)(p<0.05)。與Tfh細(xì)胞低表達(dá)組相比，高表達(dá)組與抗-SSA相關(guān)(p<0.05)，而與其他臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)無(wú)相關(guān)(p>0.05)。
　　結(jié)論：SLE患者外周血中Tfh細(xì)胞比例升高，并

4、與SLEDAI、ANA呈正相關(guān)，Tfh細(xì)胞高表達(dá)組與抗-SSA相關(guān)，提示這類細(xì)胞參與SLE發(fā)病并在疾病的活動(dòng)過(guò)程中起作用。
　　目的：通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)觀察白細(xì)胞介素-21(IL-21)及地塞米松(Dex)對(duì)Tfh細(xì)胞表達(dá)的調(diào)控作用并初步探討其可能的機(jī)制。
　　方法：收集11例SLE患者外周血，分離PBMC，分對(duì)照組、rIL-21組及rIL-21+Dex組(rIL-21濃度為200ng/μL、Dex濃度為1×10-6M/L)體外分

5、別培養(yǎng)24、72小時(shí)；另分離20例SLE患者PBMC，分對(duì)照組及Dex組(Dex濃度分別為5×10-7、1×10-6M/L，)體外培養(yǎng)24小時(shí)(每組細(xì)胞數(shù)相同，平均約106個(gè)/孔)，上述樣本均標(biāo)記CD4、PD1、CXCR5，檢測(cè)PBMC中Tfh的百分比。ELISA檢測(cè)上清中ANA的表達(dá)。Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)行組間差異比較，以p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，體外培養(yǎng)24h后rIL-21組Tfh細(xì)

6、胞的百分比顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；與rIL-21組相比，培養(yǎng)24h后rIL-21+Dex組Tfh細(xì)胞的百分比有所下降但仍高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，然而培養(yǎng)72h無(wú)差異(p>0.05)；Dex組顯著降低Tfh細(xì)胞的百分比，并具有濃度依賴性(p<0.05)。各組上清中ANA差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　結(jié)論：IL-21能夠促進(jìn)SLE患者Tfh細(xì)胞的表達(dá)，Dex對(duì)SLE患者Tfh細(xì)胞的表

7、達(dá)具有抑制作用，并且Dex對(duì)IL-21促進(jìn)的Tfh細(xì)胞的表達(dá)起抑制作用。
　　目的：研究骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone Morphogenetic Protein，BMP)通路相關(guān)微小RNA-21、-155(miR-21、miR-155)在SLE中的表達(dá)情況及與SLE臨床相關(guān)疾病指標(biāo)的關(guān)聯(lián)，探討miRNA與疾病表現(xiàn)及自身抗體產(chǎn)生的關(guān)系，推測(cè)其在SLE發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：收集59例SLE患者和25例健康對(duì)照外周血，分離PB

8、MC，Trizol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中加polyA尾，以實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)臨床癥狀或?qū)嶒?yàn)室檢查結(jié)果將SLE患者分組，不同組間行Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)，以p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：與健康對(duì)照組相比活動(dòng)組SLE患者miR-21及miR-155表達(dá)水平均升高(p<0.05)，而非活動(dòng)組無(wú)顯著差異；抗ds-DNA(+)組SLE患者miR-21、miR-155表達(dá)水平顯著