鉛致河南華溪蟹卵巢氧化損傷與細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、本文采用亞急性毒性體外暴露的方法，研究了鉛(Pb2+)對(duì)河南華溪蟹（Sinopotamon henanense）卵巢組織器官的氧化損傷和細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)設(shè)置了5個(gè)濃度組（3.675、7.35、14.70、29.40和58.80 mg·L-1）和1個(gè)對(duì)照組，在3個(gè)時(shí)間段(5、10和15d)，對(duì)超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)活力和丙二醛(MDA)含量進(jìn)行了檢測(cè)。為了進(jìn)一步探究卵巢在氧化應(yīng)激情況下引

2、發(fā)的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，對(duì)卵巢細(xì)胞中H2O2含量、抗O2-能力和抑制OH產(chǎn)生的能力進(jìn)行了測(cè)定。同時(shí)，分別采用蘇木素-伊紅(H.E.)染色法和瓊脂糖凝膠電泳法，從細(xì)胞形態(tài)學(xué)水平和生化水平觀察了卵細(xì)胞的凋亡情況。在此基礎(chǔ)上，對(duì)處理10d不同濃度Pb2+脅迫下卵巢組織中結(jié)構(gòu)型一氧化氮合酶(cNOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、總一氧化氮合酶(T-NOS)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)和半胱天冬酶-9(Caspase-9)活性進(jìn)行了測(cè)定

3、，旨在初步闡釋Pb2+誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　結(jié)果顯示:
　　(1)隨著Pb2+濃度增加和處理時(shí)間的延長(zhǎng)，卵巢中SOD、CAT活力表現(xiàn)為低濃度激活，高濃度抑制，即先升后降的變化規(guī)律，GPx活力在5d、10d先升后降，在15d活力不斷下降。MDA含量隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的升高逐漸增多。三種抗氧化酶活力的變化趨勢(shì)和MDA含量的增加，表明卵巢受到的氧化損傷程度在不斷加深。
　　(2)卵巢中H2O2含量隨Pb2+濃度

4、增加和時(shí)間延長(zhǎng)不斷上升;反之，抗O2·-能力和抑制·OH產(chǎn)生能力受到Pb2+抑制活力不斷下降。H.E.染色發(fā)現(xiàn)，凋亡細(xì)胞的核染色質(zhì)發(fā)生不規(guī)則的濃縮邊集現(xiàn)象;瓊脂糖凝膠電泳圖譜呈現(xiàn)出凋亡細(xì)胞特有的DNA梯帶。
　　(3) Pb2+處理10d，伴隨濃度的增加，cNOS、iNOS、T-NOS、Caspase-3和Caspase-9的活力逐漸升高。表明鉛誘導(dǎo)激活卵巢細(xì)胞中的NOS，產(chǎn)生了過量的NO自由基，最終可能通過以依賴Caspase-

5、9介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑引發(fā)了卵巢組織細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論:
　　(1)鉛可以導(dǎo)致河南華溪蟹卵巢組織發(fā)生氧化損傷和卵細(xì)胞凋亡。在鉛誘導(dǎo)卵細(xì)胞凋亡過程中，伴隨過量的H2O2和NO累積，激活了Caspase-9和Caspase-3，表明鉛誘導(dǎo)的卵細(xì)胞凋亡可能是通過Caspase-9介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑。
　　(2) SOD、CAT、GPX活力和MDA含量的變化能夠反映鉛對(duì)水生動(dòng)物的脅迫程度及毒性，可作為水環(huán)境重金屬污染早期預(yù)