恥垢分枝桿菌與結(jié)核分枝桿菌抗原的交叉免疫反應(yīng)研究.pdf

1、目的：
　　探討恥垢分枝桿菌（Mycobacteria smegmatis，MS）與結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteria tuberculosis，MTB）共同抗原及其免疫原性,為恥垢分枝桿菌作為結(jié)核潛在疫苗的研究提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　　以低溫超聲破碎、活菌碾磨破碎兩種方法提取MS和MTB菌體抗原，以及自己收集的培養(yǎng)后期上清濾液蛋白，通過(guò)Western blot觀察菌體抗原與抗血清的免疫交叉反應(yīng)。將MS超聲破

2、碎抗原和 MTB超聲破碎抗原分別與不完全弗氏佐劑混勻后肌肉注射于小鼠，免疫不同次數(shù)后7天，以Elispot技術(shù)檢測(cè)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞經(jīng)不同細(xì)菌抗原分別刺激后能產(chǎn)生抗原特異性IFN-γ的淋巴細(xì)胞水平，流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)各類(lèi)細(xì)胞因子水平，ELISA技術(shù)檢測(cè)血清中抗體效價(jià)水平。
　　結(jié)果：
　　Western blot結(jié)果顯示MS與MTB間存在一些主要分布在10-100KD的共同抗原，能與兩細(xì)菌的抗血清產(chǎn)生較強(qiáng)的交叉免疫反應(yīng)；ELI

3、SPOT及流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果顯示經(jīng)兩細(xì)菌分別致敏的小鼠均能兩種分枝桿菌抗原產(chǎn)生以細(xì)胞免疫為主的免疫應(yīng)答，隨免疫次數(shù)的增加免疫反應(yīng)也增強(qiáng)，免疫兩針接近高峰，免疫三針達(dá)到平衡并出現(xiàn)機(jī)體免疫系統(tǒng)的平衡調(diào)節(jié)。CD4+T及CD8+T淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ水平均明顯高于未免疫組(P＜0.05),且對(duì)非分枝桿菌屬的布氏桿菌對(duì)照抗原幾乎不產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答。ELISA結(jié)果顯示兩細(xì)菌抗原分別免疫的小鼠血清中含有大量能與共同抗原特異性結(jié)合的抗體，并且隨