DNA-PKcs-SIN1復(fù)合物介導(dǎo)的低劑量X射線促進AKT活化及成骨細(xì)胞分化.pdf

1、目的：觀察低劑量X射線作用于成骨細(xì)胞后AKT的活化情況，并探討低劑量X射線促進成骨細(xì)胞分化的機制。
　　方法：1、提取小鼠成骨細(xì)胞，分別給予單次劑量0.0 Gy、0.5 Gy、1.0 Gy、2.0 Gy和4.0 Gy照射。運用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT）檢測細(xì)胞增殖；ALP試劑盒檢測細(xì)胞早期分化情況；Real-time PCR檢測I型膠原蛋白（Col-I）和成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子2（Runx2）的

2、表達。2、小鼠成骨細(xì)胞分別給予單次劑量0.0 Gy、1.0 Gy照射。運用Western-blot法測定AKT信號通路相關(guān)蛋白的活化；分別應(yīng)用信號通路抑制劑、基因沉默（RNA i）等方法阻斷AKT信號通路后，使用ALP試劑盒檢測細(xì)胞早期分化情況及Real-time PCR檢測Col-1和Runx2的表達；利用免疫共沉淀法（Co-IP）測定DNA-PKcs-SIN1復(fù)合物的存在，探測低劑量射線作用于AKT信號通路的靶點。
　　結(jié)果：

3、1、單次劑量照射72 h后，細(xì)胞生存活性在0.0 Gy、0.5 Gy、1.0 Gy、2.0 Gy各組間無明顯差異，而4.0 Gy照射組細(xì)胞生存活性明顯下降（*p<0.05）。1.0 Gy射線照射組ALP活性水平、Co l-I的表達及Runx2的表達高于其它各組（*p<0.05）；2、Western-bolt結(jié)果顯示1.0 Gy射線照射組較對照組（0.0 Gy）明顯激活A(yù)KT Ser-473位點（*p<0.05），且1.0 Gy射線照射組

4、DNA-PKcs Thr2647位點及Thr2609位點叫對照組明顯磷酸化（*p<0.05）；使用通路阻斷劑或RNA i等，明顯抑制了低劑量X射線激活A(yù)KT信號通路的作用，并抑制了低劑量X射線所促進的ALP活性、Col-I的表達及Runx2的表達的作用（*p<0.05）；免疫共沉淀結(jié)果證實了DNA-PKcs-SIN1復(fù)合物的存在，且該復(fù)合物可以被信號通路抑制劑和RNAi抑制。（*p<.05）。
　　結(jié)論：低劑量X射線依賴DNA-P