蒙古冰草組織培養(yǎng)再生體系建立及其DREB基因功能研究.pdf

1、蒙古冰草(Agropyron mongolicum Keng)具有耐寒、耐旱等優(yōu)異特性，是其他近緣植物抗性改良資源利用的基因庫。本研究以蒙古冰草營養(yǎng)體為外植體建立了高效的蒙古冰草再生體系，并對蒙古冰草DREB基因的功能進(jìn)行了驗證。結(jié)果如下：
　　1.蒙古冰草再生體系建立
　　蒙古冰草營養(yǎng)體愈傷組織誘導(dǎo)以莖尖為宜，適宜的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2,4-D1.5mg/L+6-BA0.1mg/L，誘導(dǎo)率達(dá)到84.9％。適宜的分化

2、培養(yǎng)基為 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L，分化率53.2%。生根培養(yǎng)基 MS+NAA0.5mg/L，生根率100%。
　　2.蒙古冰草 DREB基因遺傳轉(zhuǎn)化
　　蒙古冰草DREB基因正確插入了載體pCAMBIA2300-35S-OCS的啟動子與終止子之間，成功構(gòu)建了蒙古冰草 DREB的植物表達(dá)載體 PCAMBIA2300-MDREB。
　　構(gòu)建的表達(dá)載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌 LB4404中，侵染煙草葉

3、盤，首次獲得30株轉(zhuǎn)基因再生植株，經(jīng) PCR、PCR-Southern及 RT-PCR鑒定，15株為陽性，7株出現(xiàn)了雜交譜帶，6株在轉(zhuǎn)錄水平穩(wěn)定表達(dá)。證明蒙古冰草 DREB基因已整合到煙草基因組中，并在轉(zhuǎn)錄水平上表達(dá)。
　　3.轉(zhuǎn)基因煙草抗性功能分析
　　1）干旱脅迫下轉(zhuǎn)基因煙草葉片的萎蔫程度明顯低于野生型煙草，恢復(fù)澆水后，轉(zhuǎn)基因煙草葉片的膨壓恢復(fù)也較野生型煙草好。
　　2）干旱脅迫下轉(zhuǎn)基因煙草的細(xì)胞膜相對電導(dǎo)率低于野