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文檔簡介
1、自的:檢測乙型肝炎后肝硬化患者外周血單核細(xì)胞HLA-DR和TLR4表達(dá)特點(diǎn)及其與臨床特征、預(yù)后的關(guān)系,并初步探討其改變和發(fā)生機(jī)制;通過隨訪研究了解預(yù)防性應(yīng)用口服抗生素對單核細(xì)胞表型、亞群和HLA-DR及TLR4表達(dá)的影響,為我們進(jìn)一步了解肝炎后肝硬化形成機(jī)制及肝硬化患者預(yù)防性應(yīng)用抗生素的意義提供理論依據(jù)。
方法:
1.外周血單核細(xì)胞表型的檢測:隨機(jī)選擇HBV所致的肝硬化患者54例,按Child-Pugh分為A級、B級
2、、C級,12例健康人作為對照組。采用三色熒光全血染色法,用熒光素標(biāo)記的抗CD14、抗CD16、抗HLA-DR、抗TLR4mAb進(jìn)行免疫熒光染色,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測。
2.血漿中LPS水平的檢測:采用鱟試劑盒檢測肝硬化患者及正常人血漿中的LPS水平。
3.研究對象血漿標(biāo)本取自白求恩國際和平醫(yī)院54例乙型肝炎病毒感染的住院患者和12例性別、年齡相匹配的健康志愿者。臨床指標(biāo)如ALT、AST、TBIL、ALB等用全自動生化儀
3、檢測。患者的一般情況見表1。所有患者在過去6個(gè)月內(nèi)未接受過抗病毒藥物或類固醇類藥物治療。本研究符合世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言要求,并且獲得中國科學(xué)院生物研究所和白求恩國際和平醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。所有患者均已簽署知情同意書。
結(jié)果:
1.乙型肝炎后肝硬化患者外周血單核細(xì)胞頻率、表型及HLA-DR、TLR4的表達(dá)特點(diǎn)及與臨床指標(biāo)的關(guān)系
1.1 肝硬化患者外周血單核細(xì)胞的頻率表達(dá)特點(diǎn):健康對照組、肝硬化Child
4、A級、Child B級、Child C級外周血中單核細(xì)胞的頻率分別為(6.78±2.47)%、(9.08±3.45)%、(12.93±2.05)%、(16.51±6.01)%,組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肝硬化Child A級和B級單核細(xì)胞頻率與臨床指標(biāo)無明顯相關(guān)性(P>0.05)。肝硬化Child C級單核細(xì)胞頻率與AST和TBIL均呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。
1.2 肝硬化患者外周血CD16+單核細(xì)胞的頻率
5、表達(dá)特點(diǎn):健康對照組、肝硬化Child A級、Child B級、Child C級外周血中CD16+單核細(xì)胞的頻率分別為(10.13±4.69)%、(12.63±5.07)%、(16.08±5.47)%、(23.86±8.11)%。其中,肝硬化Child A級、Child B級、Child C級三組組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),肝硬化Child B級、Child C級和健康對照組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肝硬化Chi
6、ld A級患者CD16+單核細(xì)胞頻率與ALT和AST呈正相關(guān)(P<0.05),肝硬化Child B級和Child C級患者CD16+單核細(xì)胞頻率與臨床指標(biāo)無明顯相關(guān)性(P>0.05)。
1.3 肝硬化患者外周血單核細(xì)胞HLA-DR的表達(dá)頻率特點(diǎn):健康對照組、肝硬化Child A級、Child B級、Child C級外周血中單核細(xì)胞HBA-DR的表達(dá)頻率分別為(84.35±6.86)%、(88.90±6.24)%、(85.47±
7、7.54)%、(66.38±13.43)%。其中,肝硬化Child A、Child B和健康對照組三組組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),肝硬化Child C級單核細(xì)胞HBA-DR表達(dá)頻率與健康對照組、Child A、Child B三組的組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肝硬化患者三組均與ALT、AST、TBIL無相關(guān)性(P>0.05),Child A級患者HLA-DR與ALB呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05),而Child C級H
8、LA-DR與ALB呈正相關(guān)(P<0.05)。
1.4 肝硬化患者外周血單核細(xì)胞TLR4平均熒光強(qiáng)度的表達(dá)特點(diǎn):健康對照組、肝硬化Child A級、Child B級、Child C級外周血中單核細(xì)胞TLR4平均熒光強(qiáng)度的表達(dá)分別為(6.03±1.85)、(5.55±2.13)、(4.01±2.18)、(2.92±1.69)。其中,肝硬化Child B級和Child C級與Child A級、健康對照組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.
9、05)。各組肝硬化患者單核細(xì)胞TLR4平均熒光強(qiáng)度的表達(dá)與臨床指標(biāo)均無相關(guān)性(P>0.05)。
2.肝硬化患者血漿中內(nèi)毒素的水平及與單核細(xì)胞HLA-DR和TLR4表達(dá)的關(guān)系健康對照組、肝硬化Child A級、Child B級、Child C級患者的血漿內(nèi)毒素水平分別為(3.70±2.15)pg/ml、(65.15±65.10)pg/ml、(143.37±149.16)pg/ml、(403.54±347.11)pg/ml,組間比
10、較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肝硬化Child A、Child C級患者的血漿內(nèi)毒素水平與單核細(xì)胞HLA-DR、TLR4表達(dá)均無明顯相關(guān)性(P>0.05),肝硬化Child B級患者的血漿內(nèi)毒素水平與單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)無明顯相關(guān)性(P>0.05),與TLR4呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。
3.抗生素治療前后肝硬化患者外周血單核細(xì)胞頻率、表型及HLA-DR、TLR4的表達(dá)變化
3.1 抗生素治療前后肝硬化Ch
11、ild B級外周血單核細(xì)胞頻率分別為(12.49±1.56)%、(11.69±2.14)%,Child C級分別為(12.56±2.25)%、(13.01±1.52)%。其中,肝硬化Child B級和Child C級治療前后比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
3.2 抗生素治療前后肝硬化Child B級外周血CD16+單核細(xì)胞頻率分別為(14.76±5.61)%、(12.81±3.76)%,Child C級分別為(18.58
12、±6.50)%、(16.02±3.61)%。其中,肝硬化Child B級患者治療前后CD16+單核細(xì)胞比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),Child C級治療前后比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
3.3 抗生素治療前后肝硬化Child B級外周血單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)頻率分別為(85.78±7.19)%、(86.37±5.25)%,Child C級分別為(71.59±14.10)%、(78.40±11.27)%。其中,肝硬化
13、Child B級患者治療前后單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)頻率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),Child C級患者治療前后比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3.4 抗生素治療前后肝硬化Child B級外周血單核細(xì)胞TLR4平均熒光強(qiáng)度分別為(3.61±1.72)、(4.03±1.68),Child C級分別為(4.66±1.48)、(4.93±1.03)。其中,肝硬化Child B級患者治療前后單核細(xì)胞TLR4平均熒光強(qiáng)度比較有
14、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),Child C級治療前后比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
1.乙型肝炎后肝硬化患者外周血單核細(xì)胞及CD16+單核細(xì)胞亞群頻率增加,HLA-DR在疾病早期呈上升趨勢,晚期則明顯下降,TLR4表達(dá)隨病情進(jìn)展持續(xù)性下降,其變化與病情嚴(yán)重程度和預(yù)后相關(guān),動態(tài)監(jiān)測對肝硬化的病情和預(yù)后評價(jià)具有重要意義。
2.口服抗生素治療后通過降低體內(nèi)內(nèi)毒素水平能降低CD16+單核細(xì)胞頻率、上調(diào)單
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