肝硬化患者血CD14表達及臨床意義.pdf

1、該實驗旨在研究病毒性肝炎引起的肝硬化患者的外周血中PBMC對內(nèi)毒素的反應(yīng),通過分離得到PBMC,用內(nèi)毒素刺激,測定第3h和第6h的sCD14和TNF-α水平,同時檢測mCD14的表達,研究其動態(tài)變化,以模擬機體CD14的變化過程.材料與方法:選擇2001-2002年患有病毒性肝炎后肝硬化(符合2001年全國傳染病及寄生蟲學(xué)術(shù)會議修訂的病毒性肝炎防治方案及診斷標(biāo)準(zhǔn))的住院病人59例,其中男性43例,女性16例,伴有內(nèi)毒素血癥者29例,無內(nèi)

2、毒素血癥者30例.健康對照組19例,男性11例,女性8例.所有病人及健康對照者均于抽血前禁食8-10小時,凌晨6 am抽取外周靜脈血8-10ml,注入去內(nèi)毒素試管中(去內(nèi)毒素肝素抗凝),并取其上清液0.5ml于專用試管中,于4℃冰箱保存?zhèn)溆?測定內(nèi)毒素含量).采用梯度離心法,用淋巴細胞分離液(d=1.077),分離得到PBMC.加入含10﹪FCS的PRMI 1640(2mmol/L谷氨酰胺,100IU/ml青霉素,100mg/ml鏈霉素

3、),并記數(shù)細胞、檢測細胞活力(應(yīng)>95﹪);并將細胞配成濃度為2×10<'6>/ml的細胞懸液備用.用內(nèi)毒素刺激PBMC,其標(biāo)準(zhǔn)為每2×10<'6>(細胞數(shù))加入1ng的內(nèi)毒素,然后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng).培養(yǎng)條件:37℃,5﹪CO<,2>.于第3 h、6 h取上清液,于-70℃冰箱保存待測.mCD14的檢測方法采用抗mCD14單克隆抗體(FITC標(biāo)記)標(biāo)記PBMC,用流式細胞儀記錄陽性細胞百分率和平均熒光強度.采用ELISA方法檢測上清液中