蘇云金芽孢桿菌BtZ01的發(fā)酵優(yōu)化及其對(duì)小鼠胚胎和胚后生長(zhǎng)發(fā)育的影響.pdf

1、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis，Bt)作為生物農(nóng)藥使用有著長(zhǎng)期的歷史，其具有高效、安全、生態(tài)環(huán)保等特點(diǎn)，一直都是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。做為商業(yè)使用的Bt菌株，必須具有高效、高產(chǎn)以及安全這三大特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)室保存的BtZ01是一株經(jīng)過篩選、具有高效活性的菌株，為使其盡快商業(yè)化，本研究需對(duì)其進(jìn)行發(fā)酵條件的優(yōu)化，并以此優(yōu)化數(shù)據(jù)發(fā)酵Bt菌做安全性評(píng)價(jià)，以期為其生產(chǎn)應(yīng)用提供更準(zhǔn)確的研究數(shù)據(jù)。研究報(bào)道結(jié)果如下:
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2、)試驗(yàn)采用二次回歸旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)方法優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源、氮源和無機(jī)鹽添加量，同時(shí)對(duì)部分發(fā)酵條件作了初步優(yōu)化。通過建立各原料與細(xì)菌總量間的回歸模型，分析各試驗(yàn)因子的單因素效應(yīng)和互作效應(yīng)，得到各組分最優(yōu)添加量為:玉米淀粉3.61％，黃豆餅粉3.46％，魚粉1.03％，酵母粉1.13％，蛋白胨0.18％，KH2PO40.65％，F(xiàn)eSO40.21％，CaCl20.21％，AL2(SO4)30.33％，MgSO40.23％。細(xì)菌的最佳培養(yǎng)條件

3、為:發(fā)酵溫度37℃，發(fā)酵初始pH7.5，接種量5％～10％，發(fā)酵時(shí)間44 h～50 h。在此條件下，活菌總量可達(dá)2.7×1010 CFU·mL-1，芽孢率達(dá)80％。
　　(2)為了觀察BtZ01菌株對(duì)小鼠胚胎發(fā)育和胚后生長(zhǎng)發(fā)育的影響，將48只孕鼠隨機(jī)分組，試驗(yàn)組飼喂?jié)舛确謩e為106CFU·mL-1、108CFU·mL-1、5×109CFU·mL-1的BtZ01菌液，并設(shè)滅菌水為對(duì)照組。采用行為致畸學(xué)方法檢查BtZ01對(duì)小鼠胚胎和胚

4、后發(fā)育的影響并制作臟器切片，測(cè)量臟器指數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組小鼠在胚胎和胚后發(fā)育各階段體重和體長(zhǎng)無顯著差異（P＞0.05），胚胎畸形發(fā)生率無增加，骨骼染色觀察發(fā)現(xiàn)高劑量組小鼠后囟門顯著大于其它3組(P＜0.05)。18d與48d小鼠部分臟器指數(shù)雖存在顯著差異，但卻僅有高劑量組腎臟被發(fā)現(xiàn)有病變。小鼠腸道形態(tài)在18d時(shí)無顯著差異（P＞0.05），但在48d時(shí)，高、中劑量組小鼠的腸絨毛高度和絨毛長(zhǎng)度/隱窩深度值顯著高于對(duì)照