鱖骨骼肌慢肌胚胎期發(fā)生與胚后生長發(fā)育.pdf

1、骨骼肌約占魚體體重的40–60％。骨骼肌由白肌(快肌)、紅肌(慢肌)和粉肌組成。肌球蛋白是構(gòu)成骨骼肌粗絲的主要成分,其結(jié)構(gòu)由兩條重鏈(MyHC)和兩對(duì)輕鏈(MyLC)組成。與哺乳類不同類型肌纖維交叉分布不同,魚類不同類型肌纖維有較明顯的分區(qū),不同類型骨骼肌的發(fā)育特征也不相同。MyoD是生肌調(diào)節(jié)因子 MRFs家族的主要成員之一,是脊椎動(dòng)物肌肉發(fā)育的主要調(diào)控基因,參與骨骼肌細(xì)胞形成與分化。為全面了解鱖(Siniperca chuatsi)骨

2、骼肌的形成和發(fā)育特征,本論文開展了以下研究工作:
　　采用RT-PCR、cDNA末端快速擴(kuò)增法(RACE)技術(shù)分別克隆了鱖慢肌肌球蛋白重鏈 S2和LMM區(qū) cDNA序列(長度分別為1938 bp,1814 bp),與本實(shí)驗(yàn)室前期克隆的S1序列(2520 bp)進(jìn)行拼接后,得到鱖慢肌肌球蛋白重鏈全長序列5891 bp,其中,開放閱讀框5751 bp,3’端非翻譯區(qū)140bp。鱖慢肌肌球蛋白重鏈與快肌肌球蛋白重鏈的核苷酸序列相似性為8

3、0%,氨基酸序列相似性為88%。根據(jù)所得到的cDNA序列分別設(shè)計(jì)快肌和慢肌特異性引物,合成地高辛標(biāo)記的特異性 RNA探針,通過原位雜交技術(shù)研究了鱖胚胎期慢肌與快肌的發(fā)生特征,結(jié)果表明,慢肌在受精后32 h開始發(fā)育,而快肌在受精后34 h開始發(fā)育,慢肌的發(fā)育稍早于快肌。此外,還采用RT-PCR技術(shù)克隆了鱖慢肌和快肌 MyoD基因的部分片段,通過 NCBI比對(duì)發(fā)現(xiàn),獲得了2種慢肌表達(dá)類型的MyoD(sMyoD1、sMyoD2),而1種快肌表

4、達(dá)類型的MyoD(fMyoD1)。
　　魚類快肌和慢肌分別占據(jù)骨骼肌的不同位置,表現(xiàn)不同的生長發(fā)育特征。為了解鱖慢肌纖維的胚后發(fā)育特征,制作了孵化后1-33日齡個(gè)體的石蠟切片,采用慢肌特異抗體的免疫組織化學(xué)染色技術(shù),觀察了背鰭起點(diǎn)處軀干橫切面慢肌的發(fā)育變化特征,并利用圖像分析軟件統(tǒng)計(jì)慢肌纖維的數(shù)目和面積。結(jié)果表明,孵化后慢肌位于水平肌隔附近,呈楔型,之后向背、腹兩側(cè)生長。孵化后1-9日齡慢肌為單層肌纖維,11日齡發(fā)育為多層肌纖維,