呼吸道合胞病毒感染的大鼠氣道上皮細(xì)胞對樹突狀細(xì)胞成熟和功能的影響.pdf

1、目的：和意義:
　　 呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是人類下呼吸道感染和支氣管哮喘加重的常見因為,但是RSV導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)敏感性增高和引起哮喘的免疫機制仍然未明。本課題研究的目的是探索RSV感染的氣道上皮細(xì)胞對大鼠髓系樹突狀細(xì)胞(myeloid dendritic cells,mDCs)激活和功能的影響,為進一步研究RSV誘發(fā)和加重哮喘的機制提供依據(jù)。
　　 方法：

2、　　 1、首先我們使用改進后的酶消化法分離了大鼠原代氣道上皮細(xì)胞,并且于支氣管上皮培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得成功。2、在對RSV進行擴增和滴度測定后,我們以不同的作用時間,和不同滴度的RSV感染大鼠原代氣道上皮細(xì)胞,并且使用Real time PCR的方法檢測胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(Thymic stromal.lymphopoietin,TSLP)在大鼠原代氣道上皮細(xì)胞的表達。3、接著我們分離并且培養(yǎng)擴增了大鼠mDCs,并且采用transwe

3、ll細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)將大鼠原代氣道上皮細(xì)胞和大鼠mDCs進行共培養(yǎng)。4、共培養(yǎng)后的大鼠mDCs通過Real time PCR和Flow cytometry檢測了成熟標(biāo)志物和Th2細(xì)胞因子的表達。5、為了證實共培養(yǎng)后的大鼠mDCs有無功能性成熟,我們對其進行了同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixedlymphocyte reaction,MLR)的檢測。6、為了進一步研究RSV感染的氣道上皮細(xì)胞對mDCs的激活和功能的影響的機制,特別是TSLP

4、在其中發(fā)揮的作用,我們合成了針對大鼠TsLP mRNA表達的siRNA,以一種具有永生化特征的大鼠氣道上皮細(xì)胞株RTECs(rat tracheae epithelialcells,an immortalized cell strain)為研究對象,轉(zhuǎn)染siTSLP至RTECs并下調(diào)其TSLP的表達,隨后觀察這些經(jīng)過siTSLP預(yù)處理的RTECs在感染RSV后是否仍有影響大鼠mDCs激活和功能性成熟的能力。7、最后我們再次使用RNA干擾

5、的方法初步探討了鐘樣受體(Toll-like ReceptorsTLRs)在RSV誘導(dǎo)的大鼠氣道上皮細(xì)胞TSLP表達中的作用,以及其對共培養(yǎng)后的大鼠mDCs表達Th2細(xì)胞因子的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、我們發(fā)現(xiàn)RSV感染的原代大鼠氣道上皮細(xì)胞表達TSLP出現(xiàn)迅速(6小時)且較持久(18小時)的增高。2、我們還證實RSV感染的原代大鼠氣道上皮細(xì)胞表達TSL的增高主要是由TLR3而不是TLR4介導(dǎo)的。3、大鼠mDCs在

6、與RSV感染的原代大鼠氣道上皮細(xì)胞共培養(yǎng)后出現(xiàn)了功能性成熟,包括大鼠mDCs表面共刺激分子MHCII和CD86的表達增多,OX40L和TARC的mRNAs表達增高,而大鼠mDCs刺激T細(xì)胞增殖的能力也獲得了增強。4、大鼠mDCs出現(xiàn)的激活和功能性成熟,在與經(jīng)過siTSLP預(yù)處理并且隨后感染RSV的RTECs共培養(yǎng)時受到明顯的抑制。
　　 結(jié)論：
　　 我們的研究結(jié)果顯示RSV能夠誘導(dǎo)大鼠氣道上皮細(xì)胞表達TSLP,而TSL