呼吸道合胞病毒感染的大鼠氣道上皮細(xì)胞對(duì)樹突狀細(xì)胞成熟和功能的影響.pdf

1、目的：和意義:
　　 呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是人類下呼吸道感染和支氣管哮喘加重的常見因?yàn)?但是RSV導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)敏感性增高和引起哮喘的免疫機(jī)制仍然未明。本課題研究的目的是探索RSV感染的氣道上皮細(xì)胞對(duì)大鼠髓系樹突狀細(xì)胞(myeloid dendritic cells,mDCs)激活和功能的影響,為進(jìn)一步研究RSV誘發(fā)和加重哮喘的機(jī)制提供依據(jù)。
　　 方法：

2、　　 1、首先我們使用改進(jìn)后的酶消化法分離了大鼠原代氣道上皮細(xì)胞,并且于支氣管上皮培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得成功。2、在對(duì)RSV進(jìn)行擴(kuò)增和滴度測(cè)定后,我們以不同的作用時(shí)間,和不同滴度的RSV感染大鼠原代氣道上皮細(xì)胞,并且使用Real time PCR的方法檢測(cè)胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(Thymic stromal.lymphopoietin,TSLP)在大鼠原代氣道上皮細(xì)胞的表達(dá)。3、接著我們分離并且培養(yǎng)擴(kuò)增了大鼠mDCs,并且采用transwe

3、ll細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)將大鼠原代氣道上皮細(xì)胞和大鼠mDCs進(jìn)行共培養(yǎng)。4、共培養(yǎng)后的大鼠mDCs通過Real time PCR和Flow cytometry檢測(cè)了成熟標(biāo)志物和Th2細(xì)胞因子的表達(dá)。5、為了證實(shí)共培養(yǎng)后的大鼠mDCs有無(wú)功能性成熟,我們對(duì)其進(jìn)行了同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixedlymphocyte reaction,MLR)的檢測(cè)。6、為了進(jìn)一步研究RSV感染的氣道上皮細(xì)胞對(duì)mDCs的激活和功能的影響的機(jī)制,特別是TSLP

4、在其中發(fā)揮的作用,我們合成了針對(duì)大鼠TsLP mRNA表達(dá)的siRNA,以一種具有永生化特征的大鼠氣道上皮細(xì)胞株RTECs(rat tracheae epithelialcells,an immortalized cell strain)為研究對(duì)象,轉(zhuǎn)染siTSLP至RTECs并下調(diào)其TSLP的表達(dá),隨后觀察這些經(jīng)過siTSLP預(yù)處理的RTECs在感染RSV后是否仍有影響大鼠mDCs激活和功能性成熟的能力。7、最后我們?cè)俅问褂肦NA干擾

5、的方法初步探討了鐘樣受體(Toll-like ReceptorsTLRs)在RSV誘導(dǎo)的大鼠氣道上皮細(xì)胞TSLP表達(dá)中的作用,以及其對(duì)共培養(yǎng)后的大鼠mDCs表達(dá)Th2細(xì)胞因子的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、我們發(fā)現(xiàn)RSV感染的原代大鼠氣道上皮細(xì)胞表達(dá)TSLP出現(xiàn)迅速(6小時(shí))且較持久(18小時(shí))的增高。2、我們還證實(shí)RSV感染的原代大鼠氣道上皮細(xì)胞表達(dá)TSL的增高主要是由TLR3而不是TLR4介導(dǎo)的。3、大鼠mDCs在

6、與RSV感染的原代大鼠氣道上皮細(xì)胞共培養(yǎng)后出現(xiàn)了功能性成熟,包括大鼠mDCs表面共刺激分子MHCII和CD86的表達(dá)增多,OX40L和TARC的mRNAs表達(dá)增高,而大鼠mDCs刺激T細(xì)胞增殖的能力也獲得了增強(qiáng)。4、大鼠mDCs出現(xiàn)的激活和功能性成熟,在與經(jīng)過siTSLP預(yù)處理并且隨后感染RSV的RTECs共培養(yǎng)時(shí)受到明顯的抑制。
　　 結(jié)論：
　　 我們的研究結(jié)果顯示RSV能夠誘導(dǎo)大鼠氣道上皮細(xì)胞表達(dá)TSLP,而TSL