呼吸道合胞病毒感染動(dòng)物模型的建立及應(yīng)用.pdf

1、人呼吸道合胞病毒（Human Respiratory SyncytiaVirus，hRSV）是全球范圍內(nèi)引起下呼吸道感染主要病原體之一。其感染人群年齡分布廣，新生兒與老年人是主要高危人群。據(jù)報(bào)道，幾乎所有小于2周歲嬰幼兒都有RSV感染經(jīng)歷，嬰幼兒發(fā)病住院率高達(dá)2.5-4％。RSV引起大于65周歲的老年人感染率為3-4％，病死率約為2％。早產(chǎn)兒、先天性心臟病、先天性支氣管及肺發(fā)育不良、免疫缺陷的嬰幼兒RSV病死率率高達(dá)5％，造成嚴(yán)重的醫(yī)療

2、負(fù)擔(dān)。
　　RSV無(wú)安全、有效疫苗上市，唯一獲準(zhǔn)上市的預(yù)防性RSV藥物為中和性單抗palivizumab(Synagis(@))，特異性識(shí)別RSV融合蛋白。Synagis在動(dòng)物體內(nèi)預(yù)防性試驗(yàn)的成功提示RSV感染動(dòng)物模型的建立有助于疫苗、抗體藥物的保護(hù)性研究。RSV感染動(dòng)物模型種類繁多，如小鼠、棉鼠、雪貂、猩猩等，每種動(dòng)物都有其感染特征。其中，小鼠模型由于易獲得近交系及研究用檢測(cè)試劑等，最常用于RSV感染研究，又以BALB/c小鼠應(yīng)

3、用最廣;裸鼠適應(yīng)性免疫系統(tǒng)缺陷，感染后鼻、肺內(nèi)病毒清除延遲，因此可研究先天免疫介導(dǎo)RSV引起的氣道炎癥應(yīng)答，模擬免疫缺陷人群RSV感染。
　　本研究建立不同周齡BALB/c小鼠及裸鼠模型，模擬不同易感人群RSV感染后癥狀，運(yùn)用該模型對(duì)RSV特異性抗體進(jìn)行體內(nèi)預(yù)防性評(píng)估，為RSV藥物的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。首先，本論文分別選取10周齡、30周齡、60周齡BALB/c小鼠，分別感染100μL的107PFU/mL、108PFU/mL滴度的RSV

4、后比較其臨床癥狀及病理變化。結(jié)果顯示，感染108 PFU/mL滴度的RSV感染后不同周齡小鼠都有明顯的體重下降;鼻、肺檢測(cè)到較高滴度病毒;免疫組織化學(xué)檢測(cè)抗原定位于肺泡、支氣管周圍的炎癥細(xì)胞胞漿;引起明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肺組織病理?yè)p傷;隨著小鼠周齡的增大，RSV感染后引起的臨床癥狀及病理變化越嚴(yán)重。進(jìn)一步感染10周齡裸鼠，旨在模擬免疫缺陷RSV感染癥狀，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與BALB/c小鼠相比，RSV并不能使裸鼠體重下降，但裸鼠鼻、肺內(nèi)病毒滴度高

5、、持續(xù)時(shí)間久;而裸鼠肺炎癥反應(yīng)出現(xiàn)較BALB/c早，感染后第3天即出現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng)，第7天后炎癥逐漸減輕、恢復(fù);抗原定位在肺泡、支氣管周圍，以第3天最為明顯，第12天鮮見(jiàn)有陽(yáng)性鐵銹色反應(yīng)。說(shuō)明適應(yīng)性免疫缺陷裸鼠可利用天然免疫獨(dú)立介導(dǎo)RSV感染引起的小鼠氣道炎癥。利用上述已建立好的不同周齡BALB/c小鼠模型，以1129（Synagis的鼠源性抗體）作為對(duì)照抗體，對(duì)實(shí)驗(yàn)室篩選的一株特異性針對(duì)RSV-F蛋白的強(qiáng)中和抗體5C4進(jìn)行小鼠體內(nèi)預(yù)

6、防性評(píng)估，結(jié)果顯示，5C4與1129都能有效減輕RSV引起的體重下降;降低鼻、肺內(nèi)病毒滴度;及肺部炎癥反應(yīng)炎癥。而5C4在低劑量與1129高劑量條件下對(duì)小鼠預(yù)防性效果一致;上述現(xiàn)象在不同周齡鼠呈現(xiàn)一致，說(shuō)明5C4抗體在不同周齡BALB/c小鼠上都有良好的預(yù)防性效果，其有效劑量為1129抗體的1/10，因此可作為RSV預(yù)防性藥物潛在開發(fā)對(duì)象。
　　綜上所述本論文建立不同周齡BALB/c小鼠、裸鼠感染動(dòng)物模型，模擬不同人群RSV感染臨