大黃萃取液對百草枯染毒A549細胞所致氧化應激損傷保護機制研究.pdf

1、目的：探討大黃萃取液對百草枯染毒的A549細胞所致氧化應激損傷是否具有保護作用。研究大黃萃取液是否通過Nrf-2介導的信號通路發(fā)揮抗百草枯中毒所致的氧化應激損傷作用。
　　方法：(1)MTT法檢測細胞活力以及篩選藥物濃度，觀察大黃萃取液預處理A549細胞對PQ染毒所致的毒性抑制作用；(2)通過熒光顯微鏡及ROS試劑盒檢測實驗組各細胞內ROS含量來探討大黃萃取液是否有抗氧化損傷作用；(3)分別用LDH釋放試劑盒以及MDA檢測試劑盒檢

2、測LDH以及MDA從而判斷大黃萃取液是否具有抵抗PQ所致的氧化應激損傷作用；(4)RT-PCR以及Western Blot檢測相關基因表達，進一步從基因和蛋白水平研究大黃萃取液是否通過Nrf-2介導的信號通路發(fā)揮抗氧化應激損傷作用；(5)用慢病毒轉染sh-RNA方法沉默Nrf-2基因，再次研究Nrf-2信號通路在大黃萃取液抗氧化應激損傷中的關鍵作用。
　　結果：(1)MTT結果提示隨著PQ濃度逐步上升，被染毒A549細胞存活率逐漸

3、降低（p<0.01）；較低濃度大黃萃取液（小于100μg/ml）對A549細胞存活率沒有改變（p<0.01）；加入一定濃度的大黃萃取液預處理A549細胞，預處理組細胞相比PQ組其細胞存活率更高（p<0.01）。(2)ROS檢測顯示提示：大黃萃取液預處理A549細胞，較高濃度的大黃萃取液組細胞其ROS含量相對較低（p<0.01）。(3)LDH和MDA釋放實驗結果顯示與PQ組細胞相比，大黃萃取液預處理組A549細胞LDH和MDA釋放量減少（

4、p<0.01）。(4)Western Blot和RT-PCR結果提示：大黃萃取液預處理A549細胞后，預處理組細胞抗氧化相關基因Nrf-2、HO-1、NQO1以及其蛋白表達增強（p<0.01）。(5)構建并驗證由慢病毒轉染sh-RNA形成的新的A549細胞系，RT-PCR提示sh-RNA2號組較其它組Nrf-2表達明顯更低（p<0.01）。(6)基因沉默Nrf-2后，大黃萃取液預處理A549后，其對ROS的產生、LDH和MDA的釋放、相