大黃萃取液對(duì)百草枯染毒A549細(xì)胞所致氧化應(yīng)激損傷保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討大黃萃取液對(duì)百草枯染毒的A549細(xì)胞所致氧化應(yīng)激損傷是否具有保護(hù)作用。研究大黃萃取液是否通過Nrf-2介導(dǎo)的信號(hào)通路發(fā)揮抗百草枯中毒所致的氧化應(yīng)激損傷作用。
　　方法：(1)MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力以及篩選藥物濃度，觀察大黃萃取液預(yù)處理A549細(xì)胞對(duì)PQ染毒所致的毒性抑制作用；(2)通過熒光顯微鏡及ROS試劑盒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組各細(xì)胞內(nèi)ROS含量來探討大黃萃取液是否有抗氧化損傷作用；(3)分別用LDH釋放試劑盒以及MDA檢測(cè)試劑盒檢

2、測(cè)LDH以及MDA從而判斷大黃萃取液是否具有抵抗PQ所致的氧化應(yīng)激損傷作用；(4)RT-PCR以及Western Blot檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)，進(jìn)一步從基因和蛋白水平研究大黃萃取液是否通過Nrf-2介導(dǎo)的信號(hào)通路發(fā)揮抗氧化應(yīng)激損傷作用；(5)用慢病毒轉(zhuǎn)染sh-RNA方法沉默Nrf-2基因，再次研究Nrf-2信號(hào)通路在大黃萃取液抗氧化應(yīng)激損傷中的關(guān)鍵作用。
　　結(jié)果：(1)MTT結(jié)果提示隨著PQ濃度逐步上升，被染毒A549細(xì)胞存活率逐漸

3、降低（p<0.01）；較低濃度大黃萃取液（小于100μg/ml）對(duì)A549細(xì)胞存活率沒有改變（p<0.01）；加入一定濃度的大黃萃取液預(yù)處理A549細(xì)胞，預(yù)處理組細(xì)胞相比PQ組其細(xì)胞存活率更高（p<0.01）。(2)ROS檢測(cè)顯示提示：大黃萃取液預(yù)處理A549細(xì)胞，較高濃度的大黃萃取液組細(xì)胞其ROS含量相對(duì)較低（p<0.01）。(3)LDH和MDA釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與PQ組細(xì)胞相比，大黃萃取液預(yù)處理組A549細(xì)胞LDH和MDA釋放量減少（

4、p<0.01）。(4)Western Blot和RT-PCR結(jié)果提示：大黃萃取液預(yù)處理A549細(xì)胞后，預(yù)處理組細(xì)胞抗氧化相關(guān)基因Nrf-2、HO-1、NQO1以及其蛋白表達(dá)增強(qiáng)（p<0.01）。(5)構(gòu)建并驗(yàn)證由慢病毒轉(zhuǎn)染sh-RNA形成的新的A549細(xì)胞系，RT-PCR提示sh-RNA2號(hào)組較其它組Nrf-2表達(dá)明顯更低（p<0.01）。(6)基因沉默Nrf-2后，大黃萃取液預(yù)處理A549后，其對(duì)ROS的產(chǎn)生、LDH和MDA的釋放、相