糖尿病大鼠主動(dòng)脈中HMGA1表達(dá)變化的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）腹腔注射構(gòu)建大鼠2型糖尿病模型，觀察糖尿病狀態(tài)下大鼠主動(dòng)脈血管組織中高遷移率族蛋白A1（high mobility group A1,HMGA1）mRNA和蛋白的表達(dá)水平，并探討可能影響其變化的病理因素，試圖為糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制及防治研究提供新的方向。
　　方法：4周齡雄性 SD大鼠按隨機(jī)分組方法分為：正常對(duì)照組（normol conto

2、l group，NC）、高糖高脂喂養(yǎng)組（high-sucrose-high-fat diets group,HSFDs）、糖尿病造模組（diabetes mellitus group,DM）。NC組釆用普通標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料喂養(yǎng)，HSFDs組及DM組均釆用高糖高脂飲食喂養(yǎng)，起始及喂養(yǎng)4周后分別測(cè)量體重（body weight,BW）并檢測(cè)空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、非空腹血糖（nonfasting bloo

3、d glucose，NFBG）、血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）及空腹胰島素（fasting insulin，F(xiàn)INS）等相關(guān)生化指標(biāo)的水平。4周末，DM組大鼠腹腔注射 STZ（30mg/Kg），3天后開(kāi)始每周檢測(cè)模型組大鼠N

4、FBG，觀察血糖升高水平。第8周末處死所有大鼠，采集血液標(biāo)本檢測(cè) FPG、NFBG、TC、TG、LDL、HDL、FINS及糖化血紅蛋白（Glycosylated hemoglobin A1c,HBA1c）等生化指標(biāo)；留取腹主動(dòng)脈血管組織，HE染色法觀察血管組織形態(tài)學(xué)改變，qRT-PCR、Western Blot及免疫組化法分別檢測(cè)血管中HMGA1 mRNA和蛋白表達(dá)水平。利用Spearman法分別對(duì)FPG、NFBG、TC、TG、LDL、

5、HDL和FINS與HMGA1 mRNA及蛋白表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：（1）起始時(shí)及喂養(yǎng)4周后，各組大鼠BW、FBG、NFBG、FINS及胰島素敏感指數(shù)(insulin sensitivityindex，ISI)等指標(biāo)均無(wú)明顯差異（P>0.05），起始時(shí)各組大鼠TG、TC、LDL及HDL水平亦無(wú)顯著差異（P>0.05）。注射STZ后第3、10及21天測(cè)DM組大鼠NFBG均明顯升高(＞11.1mmol/l)。第8周末，DM

6、組FBG、NFBG、HbA1c、TG、TC、LDL及HDL水平較NC及HSFD組均明顯增加，而 BW、FINS及 ISI則明顯下降；HSFDs組的BW、FINS、TC及LDL水平較NC組明顯增加，ISI則明顯下降，以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。（2）熒光定量 PCR結(jié)果顯示，DM組大鼠腹主動(dòng)脈HMGA1的mRNA表達(dá)水平明顯高于NC及HSFDs組（P<0.05）；HSFDs組HMGA1的mRNA表達(dá)水平稍高于NC組，但差異無(wú)統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（3）Western-blot及免疫組化結(jié)果均顯示，DM組大鼠腹主動(dòng)脈 HMGA1蛋白表達(dá)水平明顯高于NC及 HSFDs組（P<0.05）；HSFDs組HMGA1蛋白表達(dá)水平稍高于NC組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；此外，免疫組化結(jié)果還顯示，HMGA1蛋白主要定位于血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs)核中。（4）HE染色結(jié)果顯示，NC組血管內(nèi)膜平整、光滑

8、，血管平滑肌細(xì)胞排列整齊、緊密； DM組血管內(nèi)膜欠光滑，血管中膜增厚，平滑肌細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)疏松；HSFDs組血管形態(tài)介于前二者之間。對(duì)各組血管內(nèi)-中膜厚度（intimia-media thickness，IMT）進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果顯示，HSFDs組血管內(nèi)-中膜厚度較NC組增加，DM組較NC及HSFDs組增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（5）對(duì) FPG、NFBG、TC、TG、LDL、HDL及FINS與HMGA1 mRNA及蛋白表達(dá)水平進(jìn)

9、行Spearman秩相關(guān)分析，結(jié)果顯示FBG、NFBG、TC及LDL水平均與大鼠主動(dòng)脈中 HMGA1的表達(dá)水平呈正相關(guān)性（FBG：HMGA1 mRNA：r=0.424,P=0.039,HMGA1 protein(IOD)：r=0.549,P=0.005;NFBG:HMGA1 mRNA：r=0.584,P=0.003,HMGA1 protein(IOD):r=0.646,P=0.001;TC:HMGA1 mRNA：r=0.544,P=0.

10、006,HMGA1 protein(IOD)：r=0.726,P=0.000;LDL:HMGA1 mRNA：r=0.636，P=0.001,HMGA1 protein(IOD)：r=0.756,P=0.000）。
　　結(jié)論：（1）高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射可成功構(gòu)建大鼠2型糖尿病模型。（2）糖尿病大鼠主動(dòng)脈可發(fā)生中膜增厚，平滑肌細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)疏松等形態(tài)改變；主動(dòng)脈組織中 HMGA1 mRNA及蛋白表達(dá)水平均增加。（3