鹽酸小檗堿對糖尿病大鼠胸主動脈TLR4及MCP-1表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過觀察鹽酸小檗堿對糖尿病大鼠胸主動脈Toll樣受體4(toll like receptor，TLR4)及其介導(dǎo)的下游信號單核細胞趨化蛋白(Monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)表達的影響，進而闡明鹽酸小檗堿對T2DM大血管病變的影響及其機制。
　　方法：50只成年雄性Wistar大鼠，置于自由飲水的環(huán)境中，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。隨機分為兩組，正常對照組10只，造模組40只。禁食12h后

2、，造模組大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素STZ60mg/kg(STZ臨用前用0.1M無菌檸檬酸鈉緩沖液配制成濃度為1％、pH＝4.2的溶液)，正常組大鼠腹腔注射同等劑量的無菌檸檬酸鈉緩沖液。于72h后尾靜脈取血，血糖儀測尾靜脈血糖，末梢血糖≥16.7mmol/L，則確定為糖尿病大鼠，未達此標(biāo)準(zhǔn)者舍去不用。成模后，隨機抽取20只分為糖尿病組(10只)及鹽酸小檗堿干預(yù)組(10只)。鹽酸小檗堿干預(yù)組予鹽酸小檗堿100mg/kg/d(具體計量計算詳

3、見實驗步驟)，其余兩組每日給予同等劑量生理鹽水灌胃。實驗期間，各組大鼠自由進食水。連續(xù)灌胃8周后，禁食12h以3％戊巴比妥(80mg/kg)腹腔注射麻醉，迅速開腹，分離胸主動脈從胸主動脈采血，測定膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)水平。留取胸主動脈，以4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片，進行HE染色，光鏡下觀察血管形態(tài)學(xué)變化；免疫組化染色SP法測定胸主

4、動脈中TLR4，MCP-1的陽性染色面積及強度。計量資料均采用——X±S表示，各組干預(yù)前后的比較采用配對t檢驗；各組間比較采用單因素方差分析，方差不齊時采用多個獨立樣本比較的Kruskal-Wallis H檢驗，所有數(shù)據(jù)用SPSS21.0軟件統(tǒng)計處理，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.一般狀況的變化正常對照組大鼠精神狀態(tài)良好，尿量及飲水量適中，大便正常，皮毛均勻有光澤，眼睛有神，反應(yīng)靈敏，活潑好動。糖尿病組及小檗堿

5、干預(yù)組大鼠精神狀態(tài)差，尿量增多，飲水量增多，大便較多，體重減輕，毛色晦暗無光澤，反應(yīng)遲鈍，活動量減少；
　　2.血糖的變化治療前，與正常對照組相比，糖尿病組、小檗堿干預(yù)組血糖明顯升高(P<0.05)；糖尿病組與小檗堿干預(yù)組相比血糖無明顯差異(P>0.05)。治療后，與正常對照組相比，糖尿病組、小檗堿干預(yù)組血糖明顯升高(P<0.05)；與糖尿病組相比，小檗堿干預(yù)組血糖無明顯差異(P>0.05)。各組治療前后血糖無明顯差異(P>0.0

6、5)；
　　3.對血脂的影響
　　對膽固醇的影響：治療后，與正常對照組相比，糖尿病組、小檗堿干預(yù)組膽固醇無明顯差異(P>0.05)；與糖尿病組相比，小檗堿干預(yù)組膽固醇無明顯差異(P>0.05)；對甘油三酯的影響：治療后，與正常對照組相比，糖尿病組、小檗堿干預(yù)組甘油三酯無明顯差異(P>0.05)；與糖尿病組相比，小檗堿干預(yù)組甘油三酯無明顯差異(P>0.05)；
　　4.對丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AS

7、T)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)的影響
　　治療后，與正常對照組相比，糖尿病組、小檗堿干預(yù)組丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素氮、肌酐無明顯差異(P>0.05)；與糖尿病組相比，小檗堿干預(yù)組丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素氮、肌酐無明顯差異(P>0.05)；
　　5.血管組織形態(tài)學(xué)的表現(xiàn)光鏡下觀察HE染色后各組大鼠胸主動脈形態(tài)學(xué)改變：正常對照組動脈血管形態(tài)正常，內(nèi)皮細胞排列緊密，內(nèi)膜完整，未見炎性細胞及脂

8、質(zhì)沉積；糖尿病組可見動脈血管內(nèi)膜增厚，內(nèi)膜完整連續(xù)性受損，部分內(nèi)膜向腔內(nèi)突起，可見大量泡沫樣細胞，中膜可見較多大小不等的裂隙，平滑肌細胞排列紊亂；小檗堿干預(yù)組動脈血管內(nèi)膜輕度增厚、脂質(zhì)沉積輕微，少量泡沫樣細胞形成；
　　6.胸主動脈TLR4表達水平灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病組及小檗堿干預(yù)組TLR4表達明顯升高(P<0.05)；與糖尿病組相比，小檗堿干預(yù)組TLR4表達明顯降低(P<0.05)；
　　7.胸主動脈M

9、CP-1表達水平灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病組及小檗堿干預(yù)組MCP-1表達明顯升高(P<0.05)；與糖尿病組相比，小檗堿干預(yù)組MCP-1表達明顯降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.鹽酸小檗堿對血糖、血脂、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素氮、肌酐水平無影響。
　　2.正常組大鼠胸主動脈HE染色正常，無動脈硬化發(fā)生，而糖尿病組大鼠及鹽酸小檗堿干預(yù)組大鼠胸主動脈HE染色血管形態(tài)結(jié)構(gòu)提示有動脈硬化