基于光鑷?yán)庾V技術(shù)的葡萄球菌黃素生物合成的研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌在臨床上是極為重要的病原菌，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)造成的感染成為與乙型肝炎，艾滋病并列的世界三大感染頑疾。典型的金黃色葡萄球菌在顯微鏡下呈球型，葡萄串狀排列，因此被稱(chēng)為葡萄球菌。同時(shí)，由于它能產(chǎn)生一種金黃色的類(lèi)胡蘿卜素而獲得了金黃色葡萄球菌的名稱(chēng)。這種金黃色的類(lèi)胡蘿卜素的色素（Staphyloxanthin）增強(qiáng)了細(xì)菌對(duì)氧化脅迫和對(duì)宿主嗜中性粒細(xì)胞吞噬的抵抗能力，可以幫助細(xì)菌逃避宿主的免疫系統(tǒng)，與細(xì)菌的毒力有

2、著密切的聯(lián)系，因此阻斷葡萄球菌黃素生物合成有望成為一種新的治療MRSA感染的有效手段。
　　高效準(zhǔn)確測(cè)定金葡菌內(nèi)葡萄球菌黃素是理解其致毒機(jī)理、生物合成及新型抗生素篩選的前提條件，傳統(tǒng)的基于溶劑提取的定量方法操作較為繁瑣且使用有毒的甲醇。光鑷?yán)庾V技術(shù)(Laser tweezers Raman spectroscopy，LTRS)將光鑷技術(shù)和拉曼光譜技術(shù)結(jié)合起來(lái)，利用高度匯聚的激光束，囚禁溶液中的活細(xì)胞，再通過(guò)瞬時(shí)加大囚禁細(xì)胞的光

3、束激發(fā)細(xì)胞內(nèi)分子的拉曼散射。該技術(shù)充分結(jié)合了共焦顯微、光鑷、拉曼光譜的優(yōu)點(diǎn)，提高了檢測(cè)的靈敏度、準(zhǔn)確度，是研究生理狀態(tài)下單個(gè)活細(xì)胞內(nèi)化學(xué)物質(zhì)含量及結(jié)構(gòu)變化的有力工具。
　　為此，本文以利用光鑷?yán)庾V原位測(cè)定金葡菌活細(xì)胞內(nèi)葡萄球菌黃素的方法，并以此手段深入研究環(huán)境因素及生長(zhǎng)條件對(duì)葡萄球菌黃素生物合成的影響，了解菌體色素含量與金葡菌抵抗氧化脅迫能力的關(guān)系。本論文主要研究?jī)?nèi)容包括以下幾點(diǎn):
　　1.利用LTRS研究不同環(huán)境因素和

4、生長(zhǎng)條件對(duì)金葡菌內(nèi)葡萄球菌黃素生物合成的影響，如外界溫度、pH值、不同葡萄糖濃度、不同氮源等的影響;研究一個(gè)生長(zhǎng)周期內(nèi)(接種0-24h)內(nèi)金葡菌細(xì)胞內(nèi)積累的葡萄球菌黃素含量的漲落規(guī)律。
　　2.探索LTRS技術(shù)用于篩選和評(píng)價(jià)葡萄球菌黃素合成抑制藥物的可行性，選擇目前已經(jīng)為文獻(xiàn)證實(shí)有葡萄球菌黃素合成抑制活性的藥物，研究不同黃酮濃度與金葡菌內(nèi)葡萄球菌黃素累積濃度間是否存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，即量效關(guān)系。
　　3.利用LTRS研究葡萄球菌