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文檔簡介
1、金黃色葡萄球菌在臨床上是極為重要的病原菌,耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)造成的感染成為與乙型肝炎,艾滋病并列的世界三大感染頑疾。典型的金黃色葡萄球菌在顯微鏡下呈球型,葡萄串狀排列,因此被稱為葡萄球菌。同時(shí),由于它能產(chǎn)生一種金黃色的類胡蘿卜素而獲得了金黃色葡萄球菌的名稱。這種金黃色的類胡蘿卜素的色素(Staphyloxanthin)增強(qiáng)了細(xì)菌對氧化脅迫和對宿主嗜中性粒細(xì)胞吞噬的抵抗能力,可以幫助細(xì)菌逃避宿主的免疫系統(tǒng),與細(xì)菌的毒力有
2、著密切的聯(lián)系,因此阻斷葡萄球菌黃素生物合成有望成為一種新的治療MRSA感染的有效手段。
高效準(zhǔn)確測定金葡菌內(nèi)葡萄球菌黃素是理解其致毒機(jī)理、生物合成及新型抗生素篩選的前提條件,傳統(tǒng)的基于溶劑提取的定量方法操作較為繁瑣且使用有毒的甲醇。光鑷?yán)庾V技術(shù)(Laser tweezers Raman spectroscopy,LTRS)將光鑷技術(shù)和拉曼光譜技術(shù)結(jié)合起來,利用高度匯聚的激光束,囚禁溶液中的活細(xì)胞,再通過瞬時(shí)加大囚禁細(xì)胞的光
3、束激發(fā)細(xì)胞內(nèi)分子的拉曼散射。該技術(shù)充分結(jié)合了共焦顯微、光鑷、拉曼光譜的優(yōu)點(diǎn),提高了檢測的靈敏度、準(zhǔn)確度,是研究生理狀態(tài)下單個(gè)活細(xì)胞內(nèi)化學(xué)物質(zhì)含量及結(jié)構(gòu)變化的有力工具。
為此,本文以利用光鑷?yán)庾V原位測定金葡菌活細(xì)胞內(nèi)葡萄球菌黃素的方法,并以此手段深入研究環(huán)境因素及生長條件對葡萄球菌黃素生物合成的影響,了解菌體色素含量與金葡菌抵抗氧化脅迫能力的關(guān)系。本論文主要研究內(nèi)容包括以下幾點(diǎn):
1.利用LTRS研究不同環(huán)境因素和
4、生長條件對金葡菌內(nèi)葡萄球菌黃素生物合成的影響,如外界溫度、pH值、不同葡萄糖濃度、不同氮源等的影響;研究一個(gè)生長周期內(nèi)(接種0-24h)內(nèi)金葡菌細(xì)胞內(nèi)積累的葡萄球菌黃素含量的漲落規(guī)律。
2.探索LTRS技術(shù)用于篩選和評價(jià)葡萄球菌黃素合成抑制藥物的可行性,選擇目前已經(jīng)為文獻(xiàn)證實(shí)有葡萄球菌黃素合成抑制活性的藥物,研究不同黃酮濃度與金葡菌內(nèi)葡萄球菌黃素累積濃度間是否存在負(fù)相關(guān)關(guān)系,即量效關(guān)系。
3.利用LTRS研究葡萄球菌
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